[發明專利]一種γδT-NK細胞共培養的方法

在審

• 申請號: 201910404786.6
• 申請日: 2019-05-16
• 公開（公告）號: CN110283785A
• 公開（公告）日: 2019-09-27
• 發明（設計）人: 邢永梅;鄧蒙蒙;程簫;劉丹;吳疆;王保如
• 申請（專利權）人: 安徽瑞達健康產業有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;A61P35/00
• 代理公司: 合肥方舟知識產權代理事務所(普通合伙) 34158
• 代理人: 劉躍

本發明公開了一種γδT?NK細胞共培養的方法，具體涉及γδT細胞和NK細胞共培養誘導擴增的方法，先通過刺激誘導單個核細胞擴增為γδT細胞，同時通過采集外周血分離篩選并刺激誘導擴增出NK細胞，后通過γδT細胞與NK細胞共同誘導活化培養，同時利用多種擴增因子組合共同刺激誘導擴增γδT細胞與NK細胞，獲得的混合細胞具有數量大、擴增倍數高、細胞毒性強等特點，具有非常好的臨床應用價值。且該共培養誘導擴增方法提高細胞培養效率，縮短了培養時間，大幅度降低培養成本，也降低了培養技術難度，簡化了在臨床中治療過程，簡化了治療手段，也降低了治療成本。

技術領域：

本發明涉及生物技術領域，具體涉及γδT細胞和NK細胞共培養誘導擴增的方法，及使用該方法獲得的γδT-NK細胞組合物。

背景技術：

γδT細胞是一種既能殺傷癌細胞，腫瘤干細胞，又能識別癌抗原的免疫細胞。

γδT細胞是執行固有免疫功能的T細胞，其TCR由γ和δ鏈組成。此類T細胞主要分布于腸道呼吸道以及泌尿生殖道等黏膜和皮下組織，在外周血中只占CD3+T細胞的0.5％-1％。其TCR缺乏多樣性，可直接識別某些完整的多肽抗原。γδT細胞所識別的抗原種類有限:①HSP；②感染細胞表面CD1分子提成的脂類抗原；③某些病毒蛋白或表達于感染細胞表面的病毒蛋白；④細菌裂解產物中的磷酸化抗原。

γδT細胞是一種既能殺傷癌細胞，腫瘤干細胞，又能識別癌抗原的免疫細胞，它的殺傷性較強，但腫瘤干細胞殺傷不如NK細胞。因此，它主要用于殺傷癌細胞與協助DC細胞識別發現癌細胞抗原，然后將這些抗原進行殺傷或是傳遞給其他細胞。同時，γδT細胞主要分布于皮膚和黏膜組織上，因此對于黏膜方面的癌癥治療效果突出，比如消化道、呼吸道、生殖系統方面的癌癥效果顯著。

γδT細胞主要在胸腺中發育成熟，通過V(D)J基因重組產生γδT細胞受體(TCR)。通過特異性的基因重排，從一個共同淋巴細胞前體(common lymphoidprecursor,CLP)分化為表達αβ受體和γδ受體的T細胞系。γδT細胞不易受抗原加工和呈遞缺失的影響，因此γδT細胞具有很高的臨床腫瘤免疫治療潛在應用價值。γδT細胞在腫瘤免疫監視和抗腫瘤免疫反應中發揮重要作用。

γδT細胞作用還體現在：

①γδT細胞能夠與多種免疫細胞發生作用，參加抗腫瘤免疫應答。

②γδT細胞能夠在腫瘤發生的早期階段迅速引起有效的抗腫瘤免疫應答。

③γδT細胞在抗腫瘤免疫過程中具有重要的保護作用。

④γδT能夠利用細胞毒效應殺傷腫瘤細胞，防止腫瘤的發生發展。

⑤γδT細胞能夠分泌相關因子，這些因子能夠放大腫瘤信號。

⑥γδT細胞能分泌穿孔素，誘導腫瘤細胞凋亡。

由于γδT細胞在外周血中的含量極低，大大限制了γδT細胞作為過繼免疫細胞在臨床上的應用。目前從外周血單個核細胞擴增γδT細胞，擴增倍數低，細胞純度及細胞量不高。擴增出的γδT細胞很難滿足臨床需求，即使通過優化各種誘導條件及擴增方法擴增出的單一γδT細胞在相應的免疫性疾病和腫瘤疾病上有所應用，但是應用后并未達到人們理想中的效果。