[發(fā)明專利]一種生物正交靶向的細胞膜仿生納米顆粒及其制備方法和用途

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• 申請日: 2019-05-15
• 公開（公告）號: CN110101684A
• 公開（公告）日: 2019-08-09
• 發(fā)明（設計）人: 蔡林濤;潘宏;鄭明彬;韓雨彤;李文軍;陳澤;羅英梅
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳先進技術(shù)研究院
• 主分類號: A61K9/51
• 分類號: A61K9/51;A61K47/46;A61K47/34;A61K47/26;A61K47/18;A61K47/28;A61K41/00;A61P35/00;A61K49/00
• 代理公司: 北京市誠輝律師事務所 11430
• 代理人: 范盈

1.一種生物正交靶向的細胞膜仿生納米顆粒，其特征在于，其包括高聚物和活性成分構(gòu)成的納米核心，以及包裹在納米核心外部的細胞膜中；

所述細胞膜中嵌有修飾了生物正交的功能基團的基礎代謝物；

所述修飾了生物正交的功能基團的基礎代謝物中，生物正交的功能基團為疊氮基、炔基、辛炔基、二苯基環(huán)辛炔基、四嗪基、DBCO、DIBO、二氟化環(huán)辛炔(DIFO)、BARAC(biarylazacyclooctynone)或BCN((1R,8S,9r)-雙環(huán)[6.1.0]壬-4-炔基-9-基甲醇)；所述的基礎代謝物為氨基酸、蛋白質(zhì)、糖或脂類；所述生物正交的功能基團以及基礎代謝物通過化學鍵偶聯(lián)；

優(yōu)選地，所述細胞膜為正常細胞的細胞膜。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物正交靶向的細胞膜仿生納米顆粒，所述糖為單糖或者單糖衍生物；所述的脂類為膽堿或膽堿衍生物；

優(yōu)選地，所述單糖衍生物包括甘露糖胺鹽酸鹽、葡萄糖胺鹽酸鹽或半乳糖胺鹽酸鹽、四乙酰甘露糖(Ac₄Man)、四乙酰半乳糖(Ac₄Gal)、乙酰唾液酸(Neu5Ac)、四乙酰葡萄糖(Ac₄Glc)；

所述單糖選自甘露糖、葡萄糖、半乳糖、脫氧核糖、果糖、核糖、木糖、阿拉伯糖；

所述膽堿類似物包括二甲基乙醇胺；

所述氨基酸衍生物選自甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、絲氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、蘇氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、賴氨酸、精氨酸和組氨酸；

更優(yōu)選地，所述修飾有生物正交的功能基團的基礎代謝物選自Ac₄ManNBCN、Ac₄GalNAz、Ac₄ManNAz、Neu5AcBCN、Ac₄GalNAl、Ac4GalNAz、Ac₄ManNAl、AE-Cho、AP-Cho、AlkyneCholesterol、Az-Phe、AHA、HPG。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述生物正交靶向的細胞膜仿生納米顆粒，具有生物正交的功能基團的基礎代謝物通過在細胞培養(yǎng)時加入修飾有生物正交的功能基團的基礎代謝物，并通過代謝作用，而將修飾有生物正交的功能基團的基礎代謝物鑲嵌于細胞膜中。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述生物正交靶向的細胞膜仿生納米顆粒，構(gòu)成納米核心的高聚物為乙交酯丙交酯共聚物。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項所述生物正交靶向的細胞膜仿生納米顆粒，所述的活性成分指具有治療作用的化合物，具體包括具有化療活性的藥物、增強光敏劑、檢測試劑、抗腫瘤藥物；優(yōu)選地，所述增強光敏劑選自ICG或Ce6。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項所述的生物正交靶向的細胞膜仿生納米顆粒的制備方法，其包括以下步驟：

1)制備修飾有生物正交的功能基團的基礎代謝物；

2)天然活性細胞與修飾有生物正交的功能基團的基礎代謝物共孵育，直至獲得細胞表面嵌入了具有生物正交的功能基團的修飾活細胞；

3)通過物理方法獲得細胞表面嵌入了具有生物正交的功能基團的修飾的細胞膜；并通過物理擠壓獲得細胞膜囊泡；

4)以高分子聚合物作為載體制備包載活性成分的納米核心；

5)將步驟3)所的的細胞膜囊泡包裹在步驟4)獲得納米核心表面，得到生物正交靶向的細胞膜仿生納米顆粒。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其中，步驟3)中獲得細胞膜的方法為離心獲得細胞沉淀，然后在其中加入含蛋白酶抑制劑的低滲裂解液進行裂解，超聲破碎細胞，獲得細胞膜。

8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的制備方法，其中，步驟3)中獲得細胞膜后還包含純化細胞膜的步驟，所述純化細胞膜步驟通過差速離心的方法，優(yōu)選地，先以3200×g離心后取上清；上清液，再以1-20000×g高速離心，取上清液；上清液，最后以50000-200000×g高速離心，取沉淀，即得到純化的細胞膜。