[發(fā)明專利]一種治療抑郁癥的藥物靶點表達和純化方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910394481.1
• 申請日: 2019-05-13
• 公開（公告）號: CN110079554A
• 公開（公告）日: 2019-08-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張進
• 申請（專利權(quán)）人: 江西晶美瑞生物醫(yī)藥有限公司
• 主分類號: C12N15/866
• 分類號: C12N15/866;C07K14/47
• 代理公司: 新余市渝星知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 36124
• 代理人: 廖平

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種治療抑郁癥的藥物靶點表達和純化方法。本發(fā)明提供了一種針對抑郁癥的藥物靶點表達和純化方法，包括如下步驟：將小鼠TRPC4基因片段克隆到pAntigen Mem載體，篩選陽性克隆；提取質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化感受態(tài)DH10菌株，挑選陽性克隆；抽提桿粒，在桿狀病毒表達系統(tǒng)中產(chǎn)生P3桿狀病毒；將P3桿狀病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)入HEK293S GnTI^?細(xì)胞，誘導(dǎo)表達，收集純化藥物靶點。之后，根據(jù)針對抑郁癥的TRPC4藥物靶點，有利于相應(yīng)的特異性小分子抑制劑和相關(guān)抗體的設(shè)計，以用于抑郁癥等相關(guān)疾病的治療。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種治療抑郁癥的藥物靶點表達和純化方法。

背景技術(shù)

隨著社會轉(zhuǎn)型和社會競爭加劇，抑郁癥發(fā)病率正逐年在上升，全球有將近3.5億的抑郁癥患者。抑郁癥因其高發(fā)性、高致殘性，對家庭和社會造成沉重的精神和經(jīng)濟負(fù)擔(dān)，預(yù)計到2030年將成為全世界醫(yī)療負(fù)擔(dān)第一的疾病。

針對其發(fā)病機制，目前研究出一些抗抑郁或者焦慮藥物，它們通常作用在γ-氨基丁酸(GABA)能神經(jīng)元或5-羥色胺(5-HT)能神經(jīng)元的受體上，通過調(diào)節(jié)這類神經(jīng)遞質(zhì)的水平，從而產(chǎn)生抗焦慮的作用。由于GABA能神經(jīng)元或5-HT能神經(jīng)元在腦內(nèi)的投射區(qū)域較多，其受體在腦內(nèi)分布廣泛，這使得這類抗抑郁藥物作用靶點的專一性不強，選擇性較低，會產(chǎn)生中樞抑制等副作用，且具有很高的復(fù)發(fā)率。因此，開發(fā)一種新型、靶點特異、選擇作用較強且副作用小的抗抑郁藥物具有重要的理論意義和實際應(yīng)用價值。

研究發(fā)現(xiàn)，敲除TRPC4基因會降低社會探索任務(wù)中的社交能力水平，緩解大鼠恐懼及焦慮等行為。這些結(jié)果表明，TRPC4可能在許多不同疾病中調(diào)節(jié)社交焦慮中發(fā)揮作用，并可能在多巴胺相關(guān)成癮等生理過程中具有重要作用。相比于傳統(tǒng)針對γ-氨基丁酸(GABA)能神經(jīng)元或5-羥色胺(5-HT)開發(fā)的抗抑郁藥物特異性不強，副作用較大的特點，TRPC4主要分布于腦中的海馬區(qū)和外側(cè)隔核，而且TRP離子通道家族的同源性較低，針對TRPC4開發(fā)相應(yīng)的靶向藥物不會出現(xiàn)“脫靶效應(yīng)”，極大地提高了特異性。因此，TRPC4是非常理想并且極具潛力的新型抗抑郁藥物靶點。

研究針對抑郁癥的關(guān)鍵藥物靶點TRPC4，可以為相應(yīng)的特異性小分子抑制劑和相關(guān)抗體的設(shè)計提供依據(jù)，以用于抑郁癥等相關(guān)疾病的治療。因此，研發(fā)一種針對抑郁癥的關(guān)鍵藥物靶點TRPC4的蛋白表達和純化方法是十分有必要的。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種針對抑郁癥的藥物靶點的表達和純化方法，為研究相應(yīng)的特異性小分子抑制劑和相關(guān)抗體的設(shè)計提供了基礎(chǔ)，對研發(fā)治療抑郁癥的藥物都具有極大的幫助。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：一種針對抑郁癥的藥物靶點的表達和純化方法，包括如下步驟：將小鼠TRPC4基因片段克隆到pAntigen Mem載體，篩選陽性克隆；提取質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化感受態(tài)DH10菌株，挑選陽性克隆；抽提桿粒，在桿狀病毒表達系統(tǒng)中產(chǎn)生P3桿狀病毒；將P3桿狀病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)入HEK293S GnTI^-細(xì)胞，誘導(dǎo)表達，收集純化藥物靶點。

所述TRPC4基因片段編碼第1-758號氨基酸序列，第1-758號氨基酸序列如sequence No.1所示。

轉(zhuǎn)導(dǎo)時，HEK293S GnTI^-細(xì)胞密度為2.0-3.0×10⁶細(xì)胞/ml，P3桿狀病毒加入體積為細(xì)胞液的1/10。

細(xì)胞培養(yǎng)使用帶擋板的燒瓶。

轉(zhuǎn)導(dǎo)12-24h后，向細(xì)胞液中加入丁酸鈉至終濃度為10mM。

轉(zhuǎn)導(dǎo)12-24h后，細(xì)胞培養(yǎng)溫度降至30℃。

上述的TRPC4基因片段表達蛋白作為抑郁癥的藥物靶點的應(yīng)用。

一種含有上述的TRPC4基因片段表達蛋白的治療抑郁癥的藥物。