[發(fā)明專利]一種酵母發(fā)酵小分子重組纖連蛋白肽及其制備方法和應用

有效

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• 申請日: 2019-05-10
• 公開（公告）號: CN110204608B
• 公開（公告）日: 2020-03-20
• 發(fā)明（設計）人: 阮仁全;溫龍平
• 申請（專利權）人: 美爾健（深圳）生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/78
• 分類號: C07K14/78;C12N15/12;C12N15/81;A61K38/39;A61K8/64;A61Q19/00;A61P17/00
• 代理公司: 上海華工專利事務所(普通合伙) 31104
• 代理人: 趙孟琴;繆利明

本發(fā)明公開了一種酵母發(fā)酵小分子重組纖連蛋白肽，包括至少一個鈉鉀ATP酶β亞基結合域，所述鈉鉀ATP酶β亞基結合域的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。本發(fā)明還公開了該酵母發(fā)酵小分子重組纖連蛋白肽的制備方法以及該酵母發(fā)酵小分子重組纖連蛋白肽的應用。本發(fā)明的酵母發(fā)酵小分子重組纖連蛋白肽能夠有效被皮膚吸收，對創(chuàng)傷型皮損或角質完整的皮下?lián)p傷有優(yōu)秀的愈合和修復作用。

技術領域

本發(fā)明屬于生物工程領域，具體地說，是關于一種酵母發(fā)酵小分子重組纖連蛋白肽及其制備方法和應用。

背景技術

纖連蛋白(Fibronectin，FN)是一種大分子糖蛋白，含糖4.5％～9.5％，分子量約為450kd，它廣泛存在于血漿、多種細胞表面及細胞基質中，作為一種重要的黏附分子與11種整合素受體結合，在細胞與細胞之間、細胞與基質之間的相互作用中發(fā)揮極其重要的功能。大量研究發(fā)現，纖連蛋白(FN)參與傷口愈合、組織修復、胚胎分化、免疫反應、腫瘤分化與轉移、分娩等過程，與多種疾病有著密切的聯(lián)系。纖維連接蛋白基質聚合也促進I型膠原沉積，并增強膠原基組織結構。

纖連蛋白是一種蛋白質二聚體，由兩個幾乎相同的單體通過一對二硫鍵連接而成。由一對c末端的二硫鍵相連。每一個纖連蛋白亞基的分子量為230-250kDa，它們由三種重復的模塊(modular structures)組成，其中包括：12個纖連蛋白I型重復位點(纖連蛋白I)，2個纖連蛋白II型重復位點(纖連蛋白II)，15-17個纖連蛋白III型重復位點(纖連蛋白III)，還有2個選擇性剪接位點(EIIIA和EIIIB)以及1個可變區(qū)(V)。以上各種模塊組成了纖連蛋白的功能性結構域，其中包括：N末端的70kDa結構域(纖連蛋白I1-9)；120kDa的中心結合結構域(central binding domain，CBD；纖連蛋白III1-12)，以及肝素結合結構域(heparin-binding domain，HepII；纖連蛋白III12-14)。兩個纖連蛋白III通過可變剪接生成ED(extradomain)A與B(血漿纖連蛋白沒有EDA和EDB，但細胞纖連蛋白含有數量可變的EDA或EDB)。絕大多數的細胞纖連蛋白都含有可變區(qū)V。纖連蛋白通過纖連蛋白III10上的精氨酸–甘氨酸–天冬氨酸序列(Arg-Gly-Asp，RGD)識別整合素異二聚體并與之結合，進而影響細胞黏附、遷移等。纖連蛋白分子也具有其他黏附位點，分別與膠原、纖維蛋白、肝素等結合，共同決定了細胞外基質(extracellular matrix，ECM)的穩(wěn)定性。

纖連蛋白在醫(yī)療、美容以及科研領域有廣泛的應用市場，但從人體或動物血液和組織中提取的天然纖連蛋白產量極為有限，成本昂貴，加上纖連蛋白分子太大(由2000多個氨基酸組成，約45萬的分子量)，難以被角質結構完整的皮膚吸收。因此限制了FN的市場應用，尤其是美容護膚領域。

發(fā)明內容

為了解決上述問題，本發(fā)明基于酵母系統(tǒng)獲得重組纖連蛋白活性結構。因此，本發(fā)明的第一個目的是提供一種酵母發(fā)酵小分子重組纖連蛋白肽，以解決現有的大腸桿菌表達系統(tǒng)獲得的產量低、穩(wěn)定性低的問題。本發(fā)明的第二個目的是提供表達載體Chimeric FN。本發(fā)明的第三個目的是提供一種酵母發(fā)酵小分子重組纖連蛋白肽的制備方法。本發(fā)明的第四個目的是提供一種酵母發(fā)酵小分子重組纖連蛋白肽的應用。

為實現上述目的，本發(fā)明采用如下技術方案：

作為本發(fā)明的第一個方面，一種酵母發(fā)酵小分子重組纖連蛋白肽，包括如下氨基酸序列:鈉鉀ATP酶β亞基結合域，所述鈉鉀ATP酶β亞基結合域的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

根據本發(fā)明，所述酵母發(fā)酵小分子重組纖連蛋白肽，還包括如下氨基酸序列:

纖維蛋白結合結構域，所述纖維蛋白結合結構域的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示；

膠原蛋白結合結構域，所述的膠原蛋白結合結構域的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示；