[發明專利]一種高產膽固醇氧化酶轉化植物甾醇的方法在審
| 申請號： | 201910365621.2 | 申請日： | 2019-05-02 |
| 公開（公告）號： | CN110195091A | 公開（公告）日： | 2019-09-03 |
| 發明（設計）人： | 王友富;王榮;王炳乾;王洪福;邵振平;雷靈芝;黃橙橙;王瑞;陳克綱;應楊波 | 申請（專利權）人： | 浙江神洲藥業有限公司 |
| 主分類號： | C12P33/00 | 分類號： | C12P33/00;C12N11/08;C12N9/20 |
| 代理公司： | 北京紅福盈知識產權代理事務所(普通合伙) 11525 | 代理人： | 陳月福 |
| 地址： | 317300 浙江*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 固定化酶 膽固醇氧化酶 載體吸附 轉化植物 原酶液 甾醇 固定化脂肪酶 砂芯漏斗抽濾 酯化反應效率 高產 磨口三角瓶 植物甾醇酯 粗酶溶液 過濾回收 恒溫搖床 吸附載體 酰基供體 酯化反應 離心管 有機相 月桂酸 混勻 濾頭 吸附 搖床 洗滌 過濾 配制 應用 | ||
【權利要求書】：
1.一種高產膽固醇氧化酶轉化植物甾醇的方法，其特征在于：該方法包括如下工藝步驟：
1)將適量脂肪酶CRL溶解在緩沖液中，配制成初始濃度為4mg/mL的粗酶溶液，4℃下攪拌30min后，以4200r/min離心5min，得上清為固定化酶的原酶液；
2)將上述原酶液加至裝有吸附載體的圓底具塞離心管中，用封口膠封口，橫放在30℃，180r/min搖床中，吸附2-4h后，用砂芯漏斗抽濾提取固定化酶，并用酶溶液相同體積的緩沖液洗滌固定化酶，得到經載體吸附后的固定化酶；
3)以0.2-0.8mmol月桂酸為酰基供體，與0.2mmol植物甾醇2mL作為反應溶劑和0.1g經載體吸附后的固定化酶加至磨口三角瓶，混勻后于60-100℃恒溫搖床中反應4-8h后過濾回收固定化脂肪酶，濾液經0.22μm有機相濾頭過濾得到所述的植物甾醇酯。
2.根據權利要求1所述的高產膽固醇氧化酶轉化植物甾醇的方法，其特征在于，所述的吸附載體為大孔樹脂NKA、AB-8或LX-1000EP，以NKA、AB-8、LX-1000EP為載體吸附CRL得到的固定化酶分別簡寫為NKA-CRL、AB-8-CRL和EP-CRL。
3.根據權利要求1所述的高產膽固醇氧化酶轉化植物甾醇的方法，其特征在于，所述的緩沖液為0.02mol/L、pH5.0的磷酸鉀緩沖液。
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