[發(fā)明專利]一種載有納米顆粒的微米顆粒疫苗載體的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910364415.X
• 申請(qǐng)日: 2019-04-30
• 公開（公告）號(hào): CN110025777B
• 公開（公告）日: 2022-10-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王曉莉;張闖年;姜艷軍;馬桂蕾;董瑩
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物醫(yī)學(xué)工程研究所
• 主分類號(hào): A61K39/00
• 分類號(hào): A61K39/00;A61K39/39;A61K47/69;A61P35/00
• 代理公司: 寧波高新區(qū)核心力專利代理事務(wù)所(普通合伙) 33273
• 代理人: 涂蕭愷

一種載有納米顆粒的微米顆粒疫苗載體的制備方法，制備方法為：（1）獲得負(fù)載有抗原的納米顆粒，納米顆粒可以是氧化硅、PLGA、聚苯乙烯球、磁性四氧化三鐵等，不同的納米顆粒，抗原的負(fù)載方法不同；（2）將負(fù)載抗原的納米顆粒分散到NaCO3水溶液中，將佐劑溶解到CaCl2水溶液中，將二者混合，離心，洗滌，得到同時(shí)包載有抗原和佐劑的微米顆粒疫苗載體。該載體中同時(shí)包載有抗原和佐劑，且抗原和佐劑分布于載體的不同位置。本發(fā)明制備過(guò)程在室溫水相下進(jìn)行，條件溫和，保證了抗原和佐劑的活性及載體使用安全性；原料廉價(jià)易得，制備工藝簡(jiǎn)單，抗原負(fù)載量高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種載有納米顆粒的微米顆粒疫苗載體的制備方法，屬于生物醫(yī)藥及納微材料制備領(lǐng)域。

背景技術(shù)

目前，常見的腫瘤抗原多為蛋白質(zhì)、多肽和DNA等，在使用過(guò)程中安全可靠，但其單獨(dú)使用時(shí)免疫原性較弱，且易被酶降解。通常需要連同佐劑（CpG、R848、PolyI:C）使用或者借助其他手段保護(hù)疫苗并刺激免疫應(yīng)答。商售預(yù)防型疫苗常用佐劑為鋁佐劑，大量研究結(jié)果表明鋁佐劑對(duì)腫瘤抗原無(wú)效。因此，急需開發(fā)新型的疫苗載體同時(shí)實(shí)現(xiàn)佐劑和腫瘤抗原的共負(fù)載。

腫瘤疫苗的研究存在的問題是在于難于激發(fā)細(xì)胞免疫，引發(fā)細(xì)胞免疫反應(yīng)首先需要外源性抗原發(fā)生溶酶體逃逸至胞質(zhì)中，并與MHC I作用表達(dá)于樹突狀細(xì)胞表面。溶酶體呈酸性，一般認(rèn)為具有pH響應(yīng)性的載體具有溶酶體逃逸的能力。因此，我們采用具有pH響應(yīng)性的碳酸鈣微米顆粒包裹負(fù)載有抗原的納米顆粒作為載體，碳酸鈣實(shí)現(xiàn)溶酶體逃逸的功能，將載有抗原的納米顆粒和佐劑釋放出來(lái)，佐劑的作用位點(diǎn)是溶酶體酶，腫瘤抗原作用位點(diǎn)是胞質(zhì)中的MHC I，載有納米顆粒的微米顆粒疫苗載體使得佐劑和抗原分別作用于不同部位，從而更好發(fā)揮各自的功能。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種載有納米顆粒的微米顆粒疫苗載體的制備方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下：

一種載有納米顆粒的微米顆粒疫苗載體的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

（1）制備納米顆粒；

（2）將納米顆粒對(duì)抗原進(jìn)行負(fù)載，獲得負(fù)載有抗原的納米顆粒；

（3）將上述步驟（2）所述負(fù)載有抗原的納米顆粒加入Na₂CO₃水溶液，超聲使其分散均勻；將佐劑加入到CaCl₂水溶液中使其充分溶解；將上述兩種溶液等體積混合，攪拌之后靜置，離心，超純水洗滌，得到載有納米顆粒的微米顆粒疫苗載體，該微米顆粒疫苗載體同時(shí)含有抗原和佐劑。

進(jìn)一步，所述的納米顆粒為氧化硅、聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)納米顆粒、聚苯乙烯球或者磁性四氧化三鐵中的一種，所述的納米顆粒的粒徑小于500 nm。

進(jìn)一步，所述的抗原為蛋白質(zhì)抗原（OVA）、多肽抗原GPC-3、多肽抗原Trp2、多肽抗原M27或多肽抗原M30中的一種或幾種的組合。

進(jìn)一步，所述的佐劑為TLR激動(dòng)劑，所述的TLR激動(dòng)劑為CpG、R848、PolyI:C中的一種或多種。

進(jìn)一步，步驟（3）所述加入的負(fù)載有抗原的納米顆粒的量為0.5-200 mg；所述Na₂CO₃水溶液的加入量為1-10 mL所述Na₂CO₃水溶液的濃度為0.1-1.0 M；所述佐劑的加入量為0.25-100 mg，所述CaCl₂水溶液的加入量為1-10 mL，所述CaCl₂水溶液的濃度為0.1-1.0 M。

進(jìn)一步，所述的載有納米顆粒的微米顆粒疫苗載體的為直徑5±0.5μm。

進(jìn)一步，對(duì)于所述的不同的納米顆粒的抗原負(fù)載方式不同。