[發明專利]一種用于水樣中多種抗生素的檢測方法

在審

• 申請號: 201910361233.7
• 申請日: 2019-04-30
• 公開（公告）號: CN110243953A
• 公開（公告）日: 2019-09-17
• 發明（設計）人: 魏志雄;劉丹丹;藍明雄;王昆鵬;廖瑜;鐘瑋
• 申請（專利權）人: 東莞市食品藥品檢驗所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/08;G01N30/14
• 代理公司: 東莞市神州眾達專利商標事務所(普通合伙) 44251
• 代理人: 劉漢民

1.一種用于水樣中多種抗生素的檢測方法，其特征在于該方法包括以下步驟：

101、水樣的前處理：使用微孔濾膜對水樣進行過濾，取過濾后水樣，向過濾后水樣中加入Na₂EDTA并使其溶解，再用稀酸調節pH值至2.5-3.5，得到前處理水樣；

102、水樣中抗生素的富集：將前處理的水樣經自動固相萃取儀進行萃取，并選用經活化的HLB小柱進行痕量抗生素富集，后以甲醇洗脫，收集洗脫液，氮吹至干后復溶，濾過，作為待測液；

103、水樣的檢測：采用高效液相色譜串聯質譜法，流動相梯度洗脫，待測液進樣分析。

2.根據權利要求1所述的用于水樣中多種抗生素的檢測方法，其特征在于所述的抗生素為頭孢拉定、頭孢克肟、頭孢丙烯、頭孢羥氨芐、頭孢孟多酯、磺胺甲惡唑、磺胺二甲嘧啶、甲硝唑、替硝唑、氟康唑、酮康唑、克霉唑、諾氟沙星、環丙沙星、依諾沙星、氟羅沙星、舒巴坦及氯霉素的任意一種。

3.根據權利要求1所述的用于水樣中多種抗生素的檢測方法，其特征在于所述101步驟中，取過濾后水樣和Na₂EDTA的用量為：1000ml水樣加入0.5gNa₂EDTA，并超聲振蕩使Na₂EDTA溶解。

4.根據權利要求3所述的用于水樣中多種抗生素的檢測方法，其特征在于水樣的前處理中，所述的微孔濾膜材質為聚醚砜，內徑為25mm，孔徑為0.22μm或0.45μm；pH調節終點可接受范圍為3.0±0.1。

5.根據權利要求1所述的用于水樣中多種抗生素的檢測方法，其特征在于所述102步驟中，水樣中抗生素的富集中，HLB小柱規格為6cc/200mg或6cc/500mg，依次用10ml甲醇、5ml超純水和5ml0.1％甲酸水溶液進行活化，以5～8ml/min的速度上樣，并以10～16ml超純水淋洗，最后用10ml甲醇以1ml/min速度洗脫；且洗脫后的液體在30～40℃水浴條件下氮氣吹干，再加1ml乙腈-水(10:90，含0.1％甲酸)溶解，并過0.22μm尼龍材質的微孔濾膜。

6.根據權利要求5所述的用于水樣中多種抗生素的檢測方法，其特征在于所述HLB小柱以6ml/min的速度上樣，并以12ml超純水淋洗，最后用10ml甲醇以1ml/min速度洗脫；洗脫液在35℃水浴條件下氮氣吹干；乙腈-水的用量比例為10:90，且乙腈-水中含0.1％甲酸。

7.根據權利要求5所述的用于水樣中多種抗生素的檢測方法，其特征在于所述103步驟水樣檢測中，所述的高效液相色譜串聯質譜法液相色譜條件包括使用C₁₈色譜柱(100mm×2.0mm×3μm)，進樣體積為10μl，柱溫為35℃，流速為0.2ml/min，流動相為乙腈和0.1％甲酸水溶液，進行梯度洗脫。

8.根據權利要求7所述的所述的一種水樣中18種抗生素的檢測方法，其特征在于所述103步驟水樣檢測中，所述的高效液相色譜串聯質譜法質譜參數包括：噴霧管霧化氣(Gas1)、輔助加熱氣(Gas2)流速均為50psi、氣簾氣(Curtain Gas)為25psi、輔助加熱溫度為550℃、電離電壓(IS)分別為+5500V(正離子)及-4500V(負離子)。

9.根據權利要求1所述的用于水樣中多種抗生素的檢測方法，其特征在于所述103步驟中，以抗生素目標物保留時間及特征離子對(m/z)進行定性，以峰面積按標準曲線法進行定量。

10.根據權利要求9所述的用于水樣中多種抗生素的檢測方法，其特征在于所述103步驟中，檢出抗生素，用標準曲線法分別計算樣品中各抗生素的質量濃度，計算方法為：

式中：

ρ_i——水樣中抗生素組分的含量，ng/l；

m_i——標準曲線法計算水樣中抗生素組分的質量濃度，ng/ml；

V——最終定容體積，ml；

V_s——水樣取樣體積，l。