[發明專利]一種擲孢酵母和利用響應面法優化提取類胡蘿卜素的方法

有效

• 申請號: 201910344401.1
• 申請日: 2019-04-26
• 公開（公告）號: CN110396478B
• 公開（公告）日: 2022-06-24
• 發明（設計）人: 李朝霞;孫虎;張玉琢;劉長青;梁慧星;李桂琴;倪昊炅;徐祖偉
• 申請（專利權）人: 鹽城工學院;鹽城工學院技術轉移中心有限公司
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;C12P23/00;C12R1/645
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 王艷

1.一種提取擲孢酵母中類胡蘿卜素的方法，其特征在于：包括以下步驟，

1) 擲孢酵母的發酵培養：取培養40-48 h新鮮擲孢酵母種子液，分別以5%接種量加入30只盛有100 ml發酵培養基的1000 ml三角瓶中，振蕩培養；其中，所述發酵培養基的成分為20g/L蔗糖、10g/L蛋白胨和10g/L酵母膏，pH為6.0-6.5，所述振蕩培養的溫度為12-32℃、轉速為180r/min；

2) 濕細胞獲取：將上述3000 ml發酵液裝入離心管中，冷凍離心，倒去上清液，加入少許無菌水洗滌，再次冷凍離心，倒去上清液，合并適量離心濕細胞至另一已恒重的干凈離心管中，倒置并吹干離心管管壁和管蓋上的水分，直至恒重，獲得已恒重的濕細胞；

3) 酸熱破碎：取已恒重的濕細胞，轉移到清潔的玻璃試管中，在4.5mol/L 鹽酸濃度、3.6 ml/g細胞濕重的鹽酸用量、30min鹽酸浸泡時間、4.1min 沸水浴時間和1.0-4.0g細胞濕重條件下進行酸-熱破碎后，迅速冷卻，取出試管，將細胞泥倒入離心管中，離心，棄去上清液，得細胞碎片沉淀，水沖洗，再離心，棄去上清液，即得已破碎的細胞；

4) 類胡蘿卜素的提取：向已破碎的細胞中加入10 ml丙酮水溶液萃取，用旋渦振蕩器振蕩后離心，將上清液倒入另一支干凈的試管中，得到丙酮的類胡蘿卜素的提取液，重復提取3次；

所述擲孢酵母于2019年3月22日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC No.17429。

2.根據權利要求1所述的提取擲孢酵母中類胡蘿卜素的方法，其特征在于：所述步驟1)中新鮮擲孢酵母種子液的含菌量為5.0~10.0×10⁸個/ml。

3.根據權利要求2所述的提取擲孢酵母中類胡蘿卜素的方法，其特征在于：所述步驟2)中兩次冷凍離心條件均為3000 r/min、4℃下離心15-20min。

4.根據權利要求3所述的提取擲孢酵母中類胡蘿卜素的方法，其特征在于：步驟3)中兩次離心溫度為4℃，離心轉速均為4000 r/min，離心時間均為15-20min。

5.根據權利要求4所述的提取擲孢酵母中類胡蘿卜素的方法，其特征在于：所述步驟4)中渦旋時間為30 min，離心溫度為4℃，離心轉速為4000 r/min，離心時間為15 min。