[發明專利]一種彎曲毛細管電泳檢測多酶的方法

有效

• 申請號: 201910342854.0
• 申請日: 2019-04-26
• 公開（公告）號: CN110044988B
• 公開（公告）日: 2021-01-29
• 發明（設計）人: 王建浩;邱琳;崔朋飛;周舒文;朱志蘭;柳麗;劉曉騫
• 申請（專利權）人: 常州大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N27/447;G01N21/64
• 代理公司: 常州市英諾創信專利代理事務所(普通合伙) 32258
• 代理人: 謝新萍

本發明屬于生物分析領域，具體涉及一種彎曲毛細管電泳檢測多酶的方法。首先將量子點與多肽結合形成雙酶探針，然后將毛細管電泳所用的毛細管分別彎曲成不同個數的半圓，固定后，先進樣雙酶探針，間隔10s后進樣水解酶，一定時間后，水解酶追趕上雙酶探針，并在彎曲毛細管內充分混合，經熒光光譜儀檢測雙酶探針的熒光強度。上述技術方案操作簡單，可重復性高，建立了一種新的高靈敏多酶檢測技術。

技術領域

本發明屬于納米生物技術領域，具體涉及一種彎曲毛細管電泳檢測多酶的方法。

背景技術

當前迅速發展并廣泛應用的各種酶傳感器，將反應與檢測兩個步驟緊密結合起來，具有快速、方便、靈敏、精確的特點，在酶檢測中發揮了巨大的作用，且更進一步推動了酶檢測法的發展。通常情況下，使用單一酶底物來檢測一種特定的酶，這就造成了檢測選擇性單一的缺點，而且操作起來較為復雜。

另一方面，毛細管電泳作為一種高分辨率、高靈敏、高通量及低樣品小號的微分離技術，在生物分析領域具有廣闊的應用前景。同時，通過熒光檢測與毛細管電泳相結合，大大提高了檢測線，拓展了毛細管的應用。通常采用直的毛細管進行樣品的分析與測定。

發明內容

為解決現有技術中尚無快速、高效、便捷地檢測多種酶的方法，本發明的目的在于提供一種彎曲毛細管電泳檢測多酶的方法，首先，設計含有多個酶切位點的多肽與量子點結合形成多酶探針，利用彎曲毛細管電泳檢測不同酶在毛細管內水解多酶探針的情況。利用毛細管彎曲有利于樣品在管內充分反應的特點，研究水解酶在毛細管內水解雙酶探針的情況。通過毛細管電泳分析檢測，并計算熒光染料Cy5的峰面積(S_665nm)與QDs的峰面積(S_605nm)比值來判斷FRET變化情況，從而實現水解酶的檢測。

本發明所采用的技術方案為：將量子點與多肽結合形成雙酶探針，再將電泳所用的毛細管分別彎曲成不同個數的半圓，固定后，先進樣雙酶探針，間隔10s后進樣水解酶，經熒光光譜儀檢測雙酶探針的熒光強度；所述的彎曲毛細管為石英毛細管。

所述的水解酶為PreScission蛋白酶和凝血酶。

所述多肽含有(1)雙酶切位點；(2)用于和量子點發生FRET的熒光染料Cy5；(3)和量子點結合的6×組氨酸。

所述多肽含有的雙酶切位點為LEVLFQGP和LVPRGS。

所述多肽序列為Cy5-D₃LEVLFQGPGLVPRGSGP₉G₂H₆(Cy5-LEVLVP-QD)。

所述量子點為含有Zn的量子點，如CdSe/ZnS、CdTe/ZnS、CdSe/ZnSe或CdTe/ZnSe。

所述的雙酶探針為1μM量子點與8μM多肽等體積混合孵育10min得到。

所述的彎曲毛細管的內徑為75μm，外徑為365μm，彎曲的半圓個數為1-4個，彎曲的直徑為3cm。

所述的彎曲毛細管為180°等寬圓弧彎曲毛細管。

所述雙酶探針的進樣時間為15s，所述水解酶的進樣時間為15s，所述的水解酶進樣間隔為10s。

采用上述技術方案后，本發明所取得的有益效果是：基于CE-FL可以使用一種底物同時檢測多種酶，這個設計可以快速篩選來自微生物或其他環境的未知酶。操作簡單，可重復性高，進一步拓展了熒光探針在生物分析領域的應用。

附圖說明