[發明專利]ltk基因在制備日本青鳉無背景熒光透明品系中的應用

有效

• 申請號: 201910337330.2
• 申請日: 2019-04-25
• 公開（公告）號: CN110129328B
• 公開（公告）日: 2021-02-09
• 發明（設計）人: 陳天圣;羅君志;姜正正
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/90;A01K67/027
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 龔瑩瑩

本發明屬于分子生物學領域，具體涉及ltk基因在制備日本青鳉無背景熒光透明品系中的應用，利用本領域的常規方式以ltk基因為目的基因進行缺失或突變，可獲得無背景熒光的日本青鳉，利用基因突變的方法獲得青鳉無背景熒光透明品系比傳統方法，存活率高、育種時間短（孵出后一周內可看到表型以便后續篩選）、成本低等優點，具有科學研究的基礎價值和應用價值。該方法可以成為一種快速獲得青鳉無背景熒光透明品系的新技術，并可用于動物色素發育機理研究，且為建立觀賞魚類或者其他魚類基因突變獲得穩定品系提供方法。

技術領域

本發明屬于分子生物學領域，具體涉及ltk基因在制備日本青鳉無背景熒光透明品系中的應用，以本發明提供的日本青鳉ltk基因為靶序列，可通過表型篩選快速且高效地獲得可穩定遺傳的日本青鳉無背景熒光透明品系。

背景技術

青鳉是一種小型的卵生淡水魚類，具有雌雄易區分、鹽度和溫度(10～40℃)耐受范圍廣、生長發育迅速、容易飼養及抗病性強等特點，是發育生物學、細胞生物學、免疫學及毒理學等諸多領域的重要模式生物(Wittbrodt,Shima et al.2002,Furutani-Seiki andWittbrodt 2004)。青鳉的基因組及轉錄組等數據已較完善(Kasahara,Naruse etal.2007)，一系列細胞系也已被分離鑒定，如：單倍體胚胎干細胞(Yi,Hong et al.2010)、精原細胞系(Hong,Liu et al.2004)、胚胎干細胞系(Hong and Schartl 2006)等。青鳉產卵時間可控、量大且易于收集、胚胎透明且便于進行顯微操作，現已成功建立了半克隆青鳉(Yi,Hong et al.2009)，實現了基因敲除(Ansai and Kinoshita 2014)和基因敲降(Li,Zhu et al.2016)。因此，青鳉為色素細胞的研究提供了獨特的優勢，不管是自身還是與其他物種如斑馬魚相比較(Furutani-Seiki and Wittbrodt 2004)。

許多動物的色素結構是由于不同色素細胞的排列產生的。哺乳動物只有一種色素細胞，即黑色素細胞(藍色、棕色、紅色和黃色)，而魚類有6種不同的色素細胞。其中5種類型的色素細胞廣泛分布于魚體，包括黑色素細胞(melanophores)(黑色或灰色)、黃色素細胞(xanthophores)(黃色或橙色)、紅色素細胞(erythrophores)(紅色)、虹彩細胞(iridophores)(彩色：藍色、銀色或金色)和白色素細胞(leucophores)(暗色和白色)，而藍色素細胞(cyanophores)(鐵藍色)在系統發育上限制了它們在機體上的分布(Kelsh2010)。在成年青鳉中，4種類型的色素細胞主要分布在鱗片中以及鱗片下方，腹膜和眼睛中以及腦和脊柱的周圍，這些色素細胞的不同排列及分布使青鳉呈現出色彩斑斕的體色(Lynn Lamoreux,Kelsh et al.2005)。