[發(fā)明專利]黃芩花青素轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子SbMYB75和SbDEL的基因克隆、載體構(gòu)建及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910330805.5
• 申請日: 2019-04-23
• 公開（公告）號: CN109943575B
• 公開（公告）日: 2021-04-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙清;柳潔;崔孟穎;方譽(yù)民;凱西·馬丁
• 申請（專利權(quán)）人: 上海辰山植物園
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/11;C12N15/82;C12N5/10;C07K14/415
• 代理公司: 上海申新律師事務(wù)所 31272
• 代理人: 車超平

1.一種黃芩花青素轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子SbMYB75和SbDEL的組合，其特征在于，所述SbMYB75的基因序列如SEQ ID No. 1所示，所述SbDEL的基因序列如SEQ ID No. 3所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃芩花青素轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子SbMYB75和SbDEL的組合，其特征在于，SbMYB75的蛋白序列如SEQ ID No. 2所示，SbDEL的蛋白序列如SEQ ID No. 4所示。

3.一種用于擴(kuò)增如權(quán)利要求1或2中所述的黃芩花青素轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子SbMYB75和SbDEL的組合的引物組合物。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的引物組合物，其特征在于，用于擴(kuò)增SbMYB75基因的引物包括如SEQ ID No. 5~ SEQ ID No.6所示序列，用于擴(kuò)增SbDEL基因的引物包括如SEQ ID No. 7~ SEQ ID No.8所示序列。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的引物組合物，其特征在于，用于擴(kuò)增SbMYB75基因的引物具有Gateway 重組位點(diǎn)，用于擴(kuò)增SbDEL基因的引物具有酶切位點(diǎn)保護(hù)堿基或融合PCR位點(diǎn)。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的引物組合物，其特征在于，用于擴(kuò)增SbMYB75基因的如SEQ IDNo.11~ SEQ ID No.12所示序列的引物，用于擴(kuò)增SbDEL基因的如SEQ ID No.13~ SEQ IDNo.14所示序列的引物。

7.由權(quán)利要求1或2所述的黃芩花青素轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子SbMYB75和SbDEL的組合構(gòu)建的重組載體、重組微生物或宿主細(xì)胞。

8.一種如權(quán)利要求1或2所述的黃芩花青素轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子SbMYB75和SbDEL的組合，或權(quán)利要求7所述的重組載體、重組微生物或宿主細(xì)胞在合成花青素中的應(yīng)用。

9.根據(jù)權(quán)利要求8述的應(yīng)用，其特征在于，構(gòu)建合成花青素的生物材料的方法包括如下步驟：

（1）擴(kuò)增如SEQ ID No.1所示序列的SbMYB75基因和如SEQ ID No.3所示序列的SbDEL基因；

（2）利用擴(kuò)增產(chǎn)物構(gòu)建含SbMYB75基因和SbDEL基因的植物過表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化微生物，獲得含SbMYB75基因和SbDEL基因的重組微生物；

（3）利用重組微生物轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞，獲得含SbMYB75基因和SbDEL基因的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系，并培養(yǎng)以獲得轉(zhuǎn)基因植物組織。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述構(gòu)建合成花青素的生物材料的方法中，采用用于擴(kuò)增CaMV35S的引物，其包括SEQ ID No.9~ SEQ ID No.10所示序列，用于擴(kuò)增CaMV35S的引物具有具有酶切位點(diǎn)保護(hù)堿基或融合PCR位點(diǎn)。

11.一種黃芩花青素轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子SbDEL，其特征在于，所述SbDEL的基因序列如SEQ IDNo. 3所示。

12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的黃芩花青素轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子SbDEL，其特征在于，SbDEL的蛋白序列如SEQ ID No. 4所示。

13.由權(quán)利要求11所述的黃芩花青素轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子SbDEL構(gòu)建的重組載體、重組微生物或宿主細(xì)胞。