[發明專利]一株解淀粉芽胞桿菌生防功能基因序列及其應用

在審

• 申請號: 201910326009.4
• 申請日: 2019-04-23
• 公開（公告）號: CN109988776A
• 公開（公告）日: 2019-07-09
• 發明（設計）人: 孫淑琴;楊秀榮;孫冰冰;霍建飛;張惟
• 申請（專利權）人: 天津市植物保護研究所
• 主分類號: C12N15/31
• 分類號: C12N15/31;C12N15/11;C12N1/21;C12N15/75;C07K14/32;A01N63/00;A01P3/00;C12R1/07
• 代理公司: 天津市杰盈專利代理有限公司 12207
• 代理人: 朱紅星

1.一株解淀粉芽胞桿菌Bs-18的生防功能基因序列，如SEQ ID NO.1所示，其所對應的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.一種用于解淀粉芽胞桿菌Bs-18的生防功能基因序列構建的特異性引物，其特征在于：

T4-7 Fwd GGCGGATCCGTCCGTTTCATAAGTTGACAAGACG SEQ ID NO.3；

T4-7Rev GCCGAATTCCAAAGGAAGTGGCAGCGAATG SEQ ID NO.4。

3.一株用于構建解淀粉芽胞桿菌Bs-18的生防功能突變體，菌株命名為T4-7，其特征在于該菌株保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏登記號為：CGMCCNo.17316；保藏時間為：2019年3月8日。

4.一種采用權利要求3所述的用于構建解淀粉芽胞桿菌Bs-18的生防功能突變體T4-7進行構建的方法，其特征在于按如下的步驟進行：

（1）突變體T4-7插入基因的測序：通過反向PCR法獲得T4-7被轉座子TnYLB-1隨機插入的插入片段序列；

（2）插入基因的PMK4穿梭質粒表達載體的構建：應用限制性內切酶EcoRⅠ和BamHⅠ雙酶切T4-7的插入基因全序列和質粒PMK4，再將酶切片段連接構建重組載體；將構建的重組載體轉化大腸桿菌，挑取正確的轉化子進行測序，所測序列與插入基因序列、質粒PMK4進行BLAST比對分析，同源性100%說明構建的穿梭質粒表達載體構建成功；

（3）突變體插入基因功能的恢復：將構建的重組表達載體電擊轉化突變體T4-7；

（4）大田防治試驗驗證此基因的生防功能：通過防治黃瓜白粉病試驗，結果表明突變體恢復株的生防效果高于突變株T4-7。

5.權利要求1所述的解淀粉芽胞桿菌Bs-18的生防功能基因序列在防治黃瓜白粉病方面的應用。

6.權利要求3所述的突變株T4-7為解淀粉芽孢桿菌Bs-18被TnYLB-1轉座子隨機插入的突變株。