[發明專利]雞抗沙門氏菌感染相關的miRNA及其應用

有效

• 申請號: 201910317022.3
• 申請日: 2019-04-19
• 公開（公告）號: CN110004234B
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發明（設計）人: 趙桂蘋;劉冉冉;文杰;李慶賀;孫瑋瑋
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/113
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;陳征

本發明提供了與雞抗沙門氏菌感染相關的miRNA及其應用。本發明利用二代高通量測序技術，結合miRNA?mRNA聯合分析方法篩選到調控雞沙門氏菌感染關鍵基因Tollip的miRNA gga?miR?1306?5p，其在沙門氏菌易感組與對照組樣本間顯著性差異表達，能通過下調Tollip基因的表達，調控雞沙門氏菌感染過程中促炎性因子的釋放。本發明公開的這種miRNA可以作為雞沙門氏菌感染相關的分子標記，通過檢測該miRNA標志物，可對抗沙門氏菌感染雞進行輔助育種，在遺傳輔助抗病育種中具有重要的實際應用價值。

技術領域

發明屬于雞抗病遺傳育種技術領域，涉及與雞沙門氏菌感染相關的分子標記的篩選及應用，具體涉及調控沙門氏菌感染關鍵基因Tollip基因的miRNA及其應用。

背景技術

眾所周知，腸炎沙門氏菌(Salmonella enteritidis,SE)是唯一一種能夠通過雞蛋污染引起人類疾病的沙門氏菌血清型，嚴重威脅著人類食品及身體健康。盡管在雞工業養殖產業中可以通過各種管理措施有效地控制沙門氏菌的污染，但近幾年中關于沙門氏菌感染的報道屢見不鮮。另外，沙門氏菌對多種抗菌劑產生了嚴重的耐藥性，對動物及人類疾病的預防及治療產生了極大的威脅。為了進一步探究沙門氏菌感染機制、保護動物福利、降低禽類養殖產業經濟損失、維護食品健康，急需開發有效地預防及治療方法，開拓新的領域進行戰略規劃及未來方面的研究。

miRNA是一類非編碼、單鏈小RNA分子(18～25個核苷酸)，在轉錄后水平通過降低基因表達調節多種生物學過程，分別在細胞增殖、分化、凋亡、腫瘤形成、炎癥等生理過程中發揮重要的調控作用，多達60％的蛋白編碼基因在一定程度上由miRNA調控。越來越多的證據顯示，miRNA廣泛參與了宿主免疫沙門氏菌感染過程，是人類和動物抗病過程中所不可缺少的調節因子。如果可以獲得與宿主抗病相關的關鍵基因的miRNA作為分子標記，即可以加快抗病遺傳選擇的進展。

miRNA對動物疾病免疫方面的調控作用是通過調控其特定靶基因來實現，而僅僅借助于生物信息軟件來預測靶基因，無疑將會是大海撈針。而通過某一特定時期、特定組織中miRNA和mRNA同時深度測序分析，根據miRNA和mRNA呈負相關表達的原理，并結合靶基因軟件預測的結果，不但會大大縮小對目標miRNA靶基因的篩選范圍；通過miRNA-mRNA聯合分析，為鑒定調控像抗沙門氏菌感染這類復雜性狀的關鍵基因和miRNA提供了一個全新手段。

綜上所述，在當前家禽抗病難度較大且養殖成本急劇飆升的大背景下，利用分子標記輔助選擇法對抗沙門氏菌感染這一復雜性狀的相關機理進行探究，進而篩選出相關的調控因子及其關鍵的靶向基因，可以為了解宿主免疫沙門氏菌感染節省抗病系選育的成本。

發明內容

本發明的目的在于提供一種與雞抗沙門氏菌感染相關的miRNA及其應用。

本發明通過高通量測序技術和miRNA-mRNA聯合分析，篩選到調控雞宿主沙門氏菌感染的分子標記gga-miR-1306-5p，其靶標基因為Tollip。該分子標記在沙門氏菌感染組與對照組之間顯著性差異表達。進一步的分子生物學驗證結果顯示，gga-miR-1306-5p能通過抑制靶基因Tollip的表達，有效地調控下游促炎性因子的表達、釋放。

基于此，本發明提供了與雞抗沙門氏菌感染相關的miRNA分子標志物，其RNA序列如SEQ ID NO.1所示。

含有上述分子標志物的生物材料屬于本發明的保護范圍，所述生物材料為表達盒、轉座子、載體、宿主細胞、轉基因細胞系、工程菌。

本發明提供了上述miRNA分子標志物gga-miR-1306-5p，或gga-miR-1306-5p的表達促進劑，或上述生物材料在靶向調控Tollip基因表達量中的應用。本發明發現gga-miR-1306-5p的靶基因是Tollip基因，能夠負向調控Tollip基因。