[發(fā)明專利]促進(jìn)臍帶血T細(xì)胞體外擴(kuò)增并維持高比例TSCM亞群的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910315583.X
• 申請(qǐng)日: 2019-04-19
• 公開（公告）號(hào): CN109943527A
• 公開（公告）日: 2019-06-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王曉東;鄭武燕
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川藥智聯(lián)恒科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/0783
• 分類號(hào): C12N5/0783
• 代理公司: 成都方圓聿聯(lián)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 51241
• 代理人: 曹少華

本發(fā)明公開了一種促進(jìn)臍帶血T細(xì)胞體外擴(kuò)增并維持高比例T_SCM亞群的方法，它通過將環(huán)黃芪醇與細(xì)胞因子IL?7和細(xì)胞因子IL?15聯(lián)用，加入到T細(xì)胞的體外培養(yǎng)液中，促進(jìn)T細(xì)胞擴(kuò)增及維持高比例T_SCM亞群。本發(fā)明成功探究低濃度CAG聯(lián)合IL?7和IL?15在體外長(zhǎng)期促進(jìn)臍帶血來源T細(xì)胞擴(kuò)增的同時(shí)，能夠保持高比例的T_SCM細(xì)胞亞群。這種新的體外培養(yǎng)方式，為T細(xì)胞體外長(zhǎng)期培養(yǎng)和包括CAR?T細(xì)胞療法在內(nèi)的免疫療法奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于細(xì)胞學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種促進(jìn)臍帶血T細(xì)胞體外擴(kuò)增并維持高比例T_SCM亞群的方法。

背景技術(shù)

免疫細(xì)胞療法是最具前景的腫瘤治療手段，包括腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞(Tumor-Infiltrating Lymphocytes,TIL)治療、T細(xì)胞受體嵌合型T細(xì)胞(T cell ReceptorEngineered-T cell,TCR-T)治療和嵌合抗原受體T細(xì)胞(Chimeric Antigen ReceptorEngineered T-cell,CAR-T)治療等。其中TIL治療是從患者腫瘤組織中分離得到腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞，體外擴(kuò)增后，將具有腫瘤細(xì)胞殺傷活性的細(xì)胞群回輸患者體內(nèi)的治療手段，是目前治療黑色素瘤最有效的細(xì)胞療法；而TCR-T治療和CAR-T治療都是通過基因改造技術(shù)提高T細(xì)胞特異性識(shí)別和殺傷腫瘤細(xì)胞的能力，在體外擴(kuò)增后回輸患者體內(nèi)治療血液惡性腫瘤，同時(shí)有實(shí)驗(yàn)研究正尋求新靶點(diǎn)以治療實(shí)體瘤。TCR-T或CAR-T等免疫細(xì)胞療法發(fā)揮殺傷腫瘤作用的細(xì)胞亞群都是CD8⁺T細(xì)胞活化后的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)，然而CTL細(xì)胞屬于T細(xì)胞分化終末階段的效應(yīng)性T細(xì)胞(Effector T cell,T_E)，大量終末階段的T_E細(xì)胞回輸體內(nèi)后，T細(xì)胞功能易衰竭，導(dǎo)致擴(kuò)增能力有限，且并無免疫記憶維持能力，影響治療效果。同時(shí)，有研究證明，干細(xì)胞樣中心記憶性T細(xì)胞(stem cell-likecentral memory T cells,T_SCM)是一類不僅具有干細(xì)胞樣自我更新和不斷增殖能力特性，又具有記憶性T細(xì)胞的抗腫瘤作用和免疫記憶性的T細(xì)胞亞群?？乖碳ず罂梢援a(chǎn)生大量T_E細(xì)胞。有研究表明CAR-T_SCM細(xì)胞的抗腫瘤作用優(yōu)于其他T細(xì)胞亞群構(gòu)建的CAR-T細(xì)胞。因此，在T細(xì)胞體外擴(kuò)增的同時(shí)，保持高比例的T_SCM亞群可以提高以T細(xì)胞為基礎(chǔ)的免疫細(xì)胞治療的臨床療效。

環(huán)黃芪醇(Cycloastragenol，CAG)是從中藥黃芪提取的主要皂苷成分，屬于三萜皂苷類化合物，是黃芪甲苷的苷元。CAG具有免疫調(diào)節(jié)、抗炎、抗氧化、抗缺血性腦損傷、抗衰老等作用，例如：CAG通過抑制NLRP3炎性小體抑制炎癥，預(yù)防小鼠心肌細(xì)胞纖維化；或通過抑制NF-κB活性作為炎癥誘導(dǎo)的前列腺癌化學(xué)治療的輔助治療等。同時(shí)，CAG是中藥提取化合物中現(xiàn)今唯一發(fā)現(xiàn)的端粒酶激活劑，能夠有效激活神經(jīng)元細(xì)胞的端粒酶活性，可以作為抑郁癥的輔助治療；或者通過影響端粒酶活性和klotho基因的表達(dá)延緩人胚胎肺成纖維細(xì)胞衰老，從而被認(rèn)為具有抗衰老的作用。另外，有研究表明，高濃度(5、10、20μM)CAG可抑制CONA誘導(dǎo)的T細(xì)胞活化、增殖；低濃度(1μM)CAG會(huì)適度地延緩感染HIV病毒的人外周血來源的CD8⁺T淋巴細(xì)胞端粒的縮短，提高T細(xì)胞擴(kuò)增的潛力。但低濃度CAG是否也能提高臍帶血來源的T細(xì)胞增殖，目前未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題為：提供一種促進(jìn)臍帶血T細(xì)胞體外擴(kuò)增的方法，另外，提供一種促進(jìn)臍帶血T細(xì)胞體外擴(kuò)增時(shí)維持高比例T_SCM亞群的方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案為：

一種促進(jìn)臍帶血T細(xì)胞體外擴(kuò)增的方法，它通過將環(huán)黃芪醇與細(xì)胞因子IL-7和細(xì)胞因子IL-15聯(lián)用，加入到T細(xì)胞的體外培養(yǎng)液中，促進(jìn)T細(xì)胞擴(kuò)增。