[發明專利]一種基于適配體的腫瘤細胞染色探針組合

在審

• 申請號: 201910314932.6
• 申請日: 2019-04-18
• 公開（公告）號: CN109975097A
• 公開（公告）日: 2019-07-05
• 發明（設計）人: 賈敏;張鴻雁;毛藝霏;劉曉宇
• 申請（專利權）人: 山東師范大學
• 主分類號: G01N1/31
• 分類號: G01N1/31;G01N21/64
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 張曉鵬

本公開涉及腫瘤細胞染色技術領域，具體涉及一種基于適配體的腫瘤細胞染色探針組合。利用熒光標記適配體對循環腫瘤細胞的原位癌進行鑒定，建立小鼠乳腺癌和肝癌雙腫瘤模型，收集被捕獲的CTCs利用帶有ROX標記的乳腺癌細胞適配體和Cy5標記的肝癌細胞適配體進行特異性染色，優化了適配體染色濃度及時間，且可以同時染色，節約了染色時間，利用熒光顯微鏡觀察染色結果，可判斷CTC的來源。本公開提供的腫瘤細胞染色探針，可同時對兩種腫瘤細胞進行染色，特異性大大提高，且各熒光適配體之間互不影響，可同時進行染色，大大節約了染色時間，提高了循環腫瘤細胞原位癌判定效率。

技術領域

本公開屬于腫瘤細胞染色技術領域，具體涉及一種基于適配體的腫瘤細胞染色探針組合及試劑盒。

背景技術

公開該背景技術部分的信息僅僅旨在增加對本公開的總體背景的理解，而不必然被視為承認或以任何形式暗示該信息構成已經成為本領域一般技術人員所公知的現有技術。

1869年，Ashworth在一例癌癥死亡患者的外周血中發現了類似腫瘤的細胞，并首次提出了循環腫瘤細胞(Criculating Tumor Cells,CTCs)的概念。CTCs是指從原位癌脫落進入血液循環，并可隨血液循環到達身體各處的腫瘤細胞。CTCs在惡性腫瘤轉移過程中發揮重要作用。原發瘤不連續釋放大量CTCs進入血液循環，但只有不足0.01％的CTCs能夠存活下來，故CTCs亦被稱為外周血中的“稀有細胞”。CTCs的出現和腫瘤尺寸無關，即在原位癌形成的早期，血液循環中便有CTCs的出現。針對這一發現，研究人員可以通過捕捉外周血中的循環腫瘤細胞，并對其攜帶的相關信息進行鑒別，例如對原發病灶進行判斷。

為了實現對循環腫瘤細胞的捕獲及檢測，本領域公開了一系列針對外周血中CTCs進行捕捉的方法，包括捕獲探針法、特異性腫瘤抗原捕獲探針法或微陣列芯片捕獲方法。對樣品中的CTCs進行采集后，還需要進一步對腫瘤細胞進行檢測或鑒別，其中，采用熒光染料對腫瘤細胞進行染色從而實現癌細胞計數或相關信息鑒別是本領域常用的檢測方法，可用于腫瘤細胞原位癌鑒定、觀察抗腫瘤藥物對腫瘤細胞的抑制作用，對其形態的影響等。

核酸適配體(Aptamer)是一小段經體外篩選得到的寡核苷酸序列或者短的多肽，能與相應的配體進行高親和力和強特異性的結合，它的出現為化學生物學界和生物醫學界提供了一種新的高效快速識別的研究平臺。將適配體與熒光納米探針結合應用于蛋白和細胞傳感器的研究是一種富有前景的腫瘤細胞識別和檢測技術。

發明內容

針對上述研究背景，發明人認為在某些研究情況下，需要從多種腫瘤細胞中進行特定的腫瘤細胞的篩選甚至不同腫瘤細胞的同時染色，因此，需要建立一個能夠同時識別多種腫瘤細胞的熒光染色方法。為了實現該技術效果，本公開提供了一種能夠對不同來源的進行腫瘤細胞進行特異性篩選的染色探針組合，可實現乳腺癌細胞和肝癌細胞的同時染色，特異性良好；另外，本公開將皮下接種癌細胞的小鼠作為模型捕捉其血液循環中的循環腫瘤細胞對染色探針的能力進行檢測，結果表明本公開提供的染色探針可檢測到接種第七天血液中的循環腫瘤細胞，具有良好的檢測靈敏性。

針對以上技術效果的闡述，本公開提供以下技術方案：

本公開第一方面，提供一種用于混合腫瘤細胞染色的探針組合，所述探針組合包括一種乳腺癌細胞染色探針和一種肝癌細胞染色探針，所述乳腺癌細胞染色探針為熒光染料標記的雌激素適配體，所述肝癌細胞染色探針為熒光染料標記的肝癌細胞適配體。

優選的，所述雌激素適配體序列為：

5’-CCCGGCATGGTTGCGGAGCAGGAGTATAACACTACCATTG-3’。

優選的，所述肝癌細胞適配體序列為：

5’-ATGGTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTATGGTGCGCGCATAGCGCGCTGAGCTGAAGATCGTACCGTGAACCAT-3’。