[發明專利]ACE插入突變型探針、ACE缺失突變型探針、試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 201910298977.9
• 申請日: 2019-04-15
• 公開（公告）號: CN110129427A
• 公開（公告）日: 2019-08-16
• 發明（設計）人: 張小蒙;周敏
• 申請（專利權）人: 江蘇醫藥職業學院
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京思創大成知識產權代理有限公司 11614
• 代理人: 高爽

本發明屬于分子生物學和基因工程技術領域，涉及一種ACE插入突變型探針。該ACE插入突變型探針特異性地識別第16內含子發生插入突變的ACE基因；所述ACE插入突變型探針的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，所述SEQ ID NO:3為5'?CCAAACTTCACAGTCTCT?3'。本發明提供的ACE插入突變型探針，能夠特異性地識別第16內含子發生插入突變的ACE基因，可用于檢測或篩查ACE基因是否發生第16內含子發生插入突變。

技術領域

本發明屬于分子生物學和基因工程技術領域，更具體地，涉及一種ACE插入突變型探針、ACE缺失突變型探針、包括ACE插入突變型探針和ACE缺失突變型探針的試劑盒、以及他們的應用。

背景技術

血管緊張素轉化酶(ACE)又稱激肽酶Ⅱ或肽基-羧基肽酶，屬血管內皮細胞膜結合酶，由肽的C端將氨基酸切為兩段變換而來，可使肽鏈C端二肽殘基水解。主要功能有催化血管緊張素Ⅰ轉化為血管緊張素Ⅱ；使緩激肽失活。ACE因這兩種功能而成為治療高血壓、心力衰竭、2型糖尿病和糖尿病腎病等疾病的理想靶點。普利類藥物實際上就是血管緊張素轉換酶抑制劑，通過抑制ACE活性來治療疾病，具有逆轉高血壓左心室肥厚、延緩左心室肥厚的發展等作用。

ACE基因位于染色體17q23，基因長21kb，含26個外顯子和25個內含子。ACE基因具有多態性，可使無活性的十肽Ang I轉換為具高度血管活性、能刺激醛固酮分泌的八肽AngⅡ，并促進緩激肽降解。1990年Rig等發現ACE基因的第16內含子中有一段Alu重復序列的插入(insertion，簡寫為I)/缺失(deletion，簡寫為D)。據此ACE基因包括三種基因型，分別為：ACE基因插入突變型(簡稱ACE I/I)、ACE基因插入/缺失突變型(簡稱ACE I/D)、以及ACE基因缺失突變型(簡稱ACE D/D)。白種人、黑種人和亞洲人中D等位基因出現的頻率分別為56.2％、60.3％和39.0％。

ACE基因的多態性可影響血漿中血管緊張素轉化酶(ACE)的水平，ACE D/D型個體血漿ACE的活性升高，依那普利治療后ACE活性下降更明顯；在初治的高血壓患者中，福辛普利對ACE D/D型患者的降壓療效增強；在高血壓合并左心室肥大和舒張期充盈障礙的患者中，ACE D/D型患者服用依那普利和賴諾普利后心功能改善程度優于ACE I/D和ACE I/I型患者；ACE I/I型患者應用賴諾普利或卡托普利時腎功能下降更明顯。

發明內容

本發明的目的是提供一種ACE插入突變型探針、ACE缺失突變型探針、試劑盒及其應用，為患者選擇合適的普利類藥物提供指導。

為了實現上述目的，本發明提供一種ACE插入突變型探針，所述ACE插入突變型探針特異性地識別第16內含子發生插入突變的ACE基因；

所述ACE插入突變型探針的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，所述SEQ ID NO:3為5'-CCAAACTTCACAGTCTCT-3'。

具體地，所述ACE插入突變型探針的5'端和/或3'端具有熒光標記。例如ACE插入突變型探針的5'端具有FAM或VIC標記，ACE插入突變型探針的3'端具有MGB標記。

本發明還提供一種ACE缺失突變型探針，所述ACE缺失突變型探針特異性地識別第16內含子發生缺失突變的ACE基因；

所述ACE缺失突變型探針的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示，所述SEQ ID NO:4為5'-AACATTCTCATCCACGC-3'。

具體地，所述ACE缺失突變型探針的5'端和/或3'端具有熒光標記。例如ACE缺失突變型探針的5'端具有FAM或VIC標記，ACE缺失突變型探針的3'端具有MGB標記。

本發明還提供一種試劑盒，所述試劑盒包括：

引物；