[發明專利]遲發型感音神經性耳聾致病基因DIAPH1突變檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201910294872.6
• 申請日: 2019-04-12
• 公開（公告）號: CN109852691B
• 公開（公告）日: 2023-04-28
• 發明（設計）人: 查定軍;王淑娟;溫立婷;梁鵬飛;林穎;陳俊;韓宇;李薇;李瓊;邱建華
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第四軍醫大學
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 范巍

本發明公開了一種遲發型感音神經性耳聾致病基因DIAPH1突變檢測試劑盒。試劑盒包括從待測樣品中提取DNA的試劑、用于擴增樣本DNA的PCR反應試劑、對PCR擴增產物進行測序的試劑；所述擴增樣本DNA的PCR反應試劑包括PCR引物。使用本發明所述試劑盒檢測患者是否存在DIAPH1基因NM_001314007:c.3575?2AG突變，從而診斷遲發型感音神經性耳聾發生的原因，該試劑盒將有利于臨床上開展遲發型感音神經性耳聾患者的DIAPH1突變篩查工作，為遲發型感音神經性耳聾患者的診斷提供依據。

技術領域

本發明涉及基因檢測領域，具體涉及在臨床診斷遲發型感音神經性耳聾中應用的DIAPH1基因單個突變位點c.3575-2AG分型檢測試劑盒。

背景技術

DIAPH1是1997年Lynch等確定DFNA1型耳聾致病基因。20年來已有數個DIAPH1基因突變引起的遺傳性耳聾家系被報道，大多數患者表現為遲發性聽力損失伴或不伴血液學異常。此外，還發現DIAPH1基因突變與常染色體隱性遺傳小頭綜合征相關。遺傳性耳聾具有明顯的表型多樣性和遺傳異質性。DIAPH1基因(OMIM:602121)全稱diaphanousrelatedformin1，其他名稱有：DIA1、DRF1、DFNA1、LFHL1、SCBMS、hDIA1，定位于5q31.3，基因組位置chr5:141,515,021-141,619,055,全長104035bp，cDNA含28個外顯子。由于剪接位點的不同，人類DIAPH1基因有3種不同的轉錄異構體(transcript?variants)，包括isoform1、isoform2、isoform3。其中，isoform1編碼的蛋白質最長，常作為DIAPH1基因編碼DNA的標準序列，其mRNA全長5804bp，蛋白質編碼區域在mRNA的142bp～3960bp區域，編碼含有1272個氨基酸的蛋白質。

Neuhaus等發現位于DIAPH1基因27號外顯子的框移突變p.Ala1210SerfsTer31(c.3624_3625delAG)和無義突變c.3637CT(p.Arg1213Ter)同樣引起了類似的DIAPH?1-RD，并且詳細分析了患者的聽力損失特征，發現與以往DIAPH1突變引起低頻聽力損失不同，該突變患者表現為先天性中高頻聽力損失并且快速進展，部分患者伴中性粒細胞減少癥和出血傾向。有研究使用免疫熒光技術研究了DIAPH1蛋白在小鼠耳蝸細胞及神經結構的分布，發現在耳蝸中的內柱細胞(IPC)、外毛細胞(OHC)基底部(可能為Deiter細胞)、螺旋神經節神經元、蝸神經中心區域以及雪旺細胞和少突膠質細胞之間的交界區域都有DIAPH1蛋白的分布；推測上述突變可能影響肌動蛋白和微管的重構，導致內耳細胞和巨核細胞中細胞骨架和剛性結構發生改變，是耳聾伴隨巨核細胞血小板減少癥的機制之一，因此建議將血常規檢查作為常染色體顯性遺傳性耳聾患者的常規檢查項目，以幫助鎖定具有綜合征樣表型特征的DIAPH1基因突變。同樣的無義突變和類似綜合征樣表型也見于Ganaha等的報道，該文提出位于DAD結構域的突變位點c.3637CT(p.Arg1213Ter)是該基因的熱點突變位點；不同的是該文中家系患者的血小板數量比Strilt等的報道更少，且隨著年齡增長而減少，因此推測血小板減少也是漸進性的；文中指出MYH?9相關性綜合征如：May-Hegglinanomaly(OMIM?155100)、Fechtner?syndrome(OMIM153640)、Epstainsyndrome(OMIM?153650)、Sebastiansyndrome(OMIM606249)也表現為聽力損失及MTP，因此，建議有DIAPH?1-RD的患者需要同時檢測DIAPH1和MYH9基因。但常染色體顯性遺傳性耳聾伴血小板減少癥的分子機制目前尚未明確。