[發明專利]聽神經病譜系障礙相關的OTOF基因突變檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201910294225.5
• 申請日: 2019-04-12
• 公開（公告）號: CN109825576B
• 公開（公告）日: 2023-03-31
• 發明（設計）人: 查定軍;王淑娟;陳俊;梁鵬飛;王劍;李瓊;李薇;邱建華
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第四軍醫大學
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6858
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 范巍

本發明公開了一種聽神經病譜系障礙相關的OTOF基因突變檢測試劑盒，試劑盒包括從待測樣品中提取DNA的試劑、用于擴增樣本DNA的PCR反應試劑、對PCR擴增產物進行測序的試劑；所述擴增樣本DNA的PCR反應試劑包括PCR引物。使用本發明所述試劑盒檢測患者中是否存在OTOF基因NM_01287489.1:c.1945_1960del16bp缺失突變，從而診斷聽神經病譜系障礙發生的原因。該試劑盒將有利于臨床上開展聽神經病譜系障礙患者的OTOF突變篩查工作，為聽神經病譜系障礙患者的診斷提供依據。

技術領域

本發明涉及基因檢測領域，具體涉及在診斷聽神經病/聽神經病譜系障礙中應用的OTOF基因突變c.1945_1960del16bp(p.R649Gfs*11)分型檢測試劑盒。

背景技術

聽神經病(auditory neuropathy,AN)是耳蝸內毛細胞、聽神經突觸或聽神經功能不良所導致的聽力障礙。它是導致嬰幼兒和青少年語言交流障礙的重要疾病，在每年新發的聽力損失患兒中約占8％，其發病與遺傳因素密切相關。

聽神經病依據發病部位分為兩型：Ⅰ型聽神經病為突觸后型；Ⅱ型聽神經病為突觸及突觸前型。人工耳蝸植入對于雙耳重度感音神經性耳聾患者，是最好的治療選擇，但僅對Ⅱ型聽神經病有效。聽神經病診斷依靠聽力學及影像學檢查，但依據聽力學檢查結果無法進行分型，目前致病基因型是分型的主要依據。與Ⅱ型聽神經病譜系障礙相關的基因主要是OTOF基因。

OTOF(otoferlin)基因是第一個克隆的與非綜合征型聽神經病相關的基因，位于2p23的DFNB9基因座內。OTOF基因DNA序列全長101496bp，共有4種長短不同的轉錄本變異體。其中最長的亞型包含48個外顯子，編碼氨基酸長度為1997aa的蛋白質Otoferlin。Yasunaga等對多個常染色體隱性非綜合征型語前聾家系進行候選基因研究，發現三個家系共21名患病成員的OTOF基因都在第18個外顯子發生無義突變，提前生成終止密碼子并形成截短蛋白，致使其編碼的Otoferlin蛋白不完整。在內耳中，Otoferlin蛋白在成熟的耳蝸中只表達于內毛細胞，且大多表達于內毛細胞基底外側部。該蛋白是一種鈣離子感受器，基因突變可導致內毛細胞活動區囊泡的胞吐作用被抑制，神經遞質釋放減少，進而引起神經沖動的減少；此外，神經遞質可能對突觸后神經纖維有營養作用，如營養作用的減弱可導致突觸后膜產生退行性病變，或許可以解釋聽神經病譜系障礙(ANSD)患者漸進性聽力損失的特點。

根據文獻報道OTOF基因突變在世界范圍內廣泛存在于SNHL人群中，同時也是ANSD患者的主要致病突變。根據文獻統計我國漢族ANSD患者中約5.5％的散發病例可將病因歸于OTOF基因的突變。不同地區和種族ANSD人群的突變譜還不完善，目前已知的OTOF基因突變類型有100余種，絕大多數為無義突變、截短突變或移碼突變。OTOF基因是目前研究最為廣泛和深入的ANSD相關基因。

綜合國內外文獻報道的治療經驗，相比傳統助聽器和藥物治療，人工耳蝸植入的干預效果更為確切，但差異很大，具體到個體患者的選擇仍需謹慎。以往研究認為可參考以下幾個方面預測植入后的效果：1、術前MRI如發現中樞系統病變，可能預示術后效果不佳，尤其是有蝸神經缺失或形態異常時；2、基因突變類型與術后療效的關系還不確定，現有研究結果可作為參考，通常認為OTOF突變引起突觸前病變導致的ANSD術后效果較好，推測是人工耳蝸提供的直接電刺激繞過了病變部位，而軸突損傷導致突觸后病變和涉及聽神經全程的病變(如遺傳性共濟失調癥和耳聾-肌張力不全癥-視神經元病)引起的ANSD術后效果較差。所以明確聽神經病/聽神經病譜系障礙致病基因，對患者進行分型并評估人工耳蝸的植入效果具有重要意義。目前尚未見到關于OTOF基因缺失突變NM_01287489.1:c.1945_1960del16bp(p.R649Gfs*11)的報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種聽神經病譜系障礙相關的OTOF基因突變檢測試劑盒。

為達到上述目的，本發明采用了以下技術方案：