[發明專利]一種梅毒螺旋體DNA疫苗及其應用

在審

• 申請號: 201910293676.7
• 申請日: 2019-04-12
• 公開（公告）號: CN109985234A
• 公開（公告）日: 2019-07-09
• 發明（設計）人: 吳移謀;鄭康;徐嫚
• 申請（專利權）人: 南華大學
• 主分類號: A61K39/02
• 分類號: A61K39/02;A61K39/39;A61P31/04
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 劉猛;趙青朵

本發明涉及免疫技術領域，公開了一種梅毒螺旋體DNA疫苗及其應用。本發明所述梅毒螺旋體DNA疫苗為包含梅毒螺旋體鞭毛蛋白FlaB3編碼基因的真核質粒。本發明以插入梅毒螺旋體鞭毛蛋白FlaB3編碼基因的重組質粒作為一種新型的DNA疫苗，其能夠誘導Th?1型免疫反應，抑制梅毒螺旋體在體內的擴散，在此基礎上經過CpG修飾的疫苗表現出更加優異的免疫保護效果。

技術領域

本發明涉及免疫技術領域，具體涉及一種梅毒螺旋體DNA疫苗及其應用。

背景技術

梅毒是由梅毒螺旋體引起的慢性性傳播疾病。目前，其仍然是一種全球流行的疾病，估計全世界有3600萬例病例。近年來，男男同性戀者的梅毒發病率急劇上升。先天性梅毒感染的發病率也在上升，全世界每年估計有136萬孕婦感染，其中約520,000例導致流產或死產等。此外，梅毒還增加了感染HIV的風險。盡管梅毒螺旋體對青霉素治療依然敏感，但全球梅毒患病率卻依然增加，因此迫切需要開發有效的梅毒疫苗作為全球消除梅毒的傳統篩查和治療方法的補充。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種梅毒螺旋體DNA疫苗及其應用，使得所述疫苗能夠誘導Th-1型免疫反應，抑制梅毒螺旋體在體內的擴散，可應用到相關疫苗的制備中。

為了實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種梅毒螺旋體DNA疫苗，其為包含梅毒螺旋體鞭毛蛋白FlaB3編碼基因的真核質粒。作為優選，所述真核質粒為市售的pcDNA3質粒。

在本發明具體實施方式中，提供了一種包含梅毒螺旋體鞭毛蛋白FlaB3編碼基因的pcDNA3質粒；其中，所述FlaB3編碼基因插入到PCMV序列和BGH pA序列之間。

在本發明具體實施方式中，本發明還對上述包含梅毒螺旋體鞭毛蛋白FlaB3編碼基因的真核質粒進行了CpG修飾，即在質粒中插入單個或兩個以上拷貝的CpG核苷酸序列。

此外，上述CpG修飾也可理解為所述DNA疫苗除包含梅毒螺旋體鞭毛蛋白FlaB3編碼基因的真核質粒作為組分外，還包括CpG核苷酸序列作為另一組份。

作為優選，所述單個或兩個以上拷貝的CpG核苷酸序列插入到FlaB3編碼基因上游。更為具體地，當真核質粒為pcDNA3時，所述單個或兩個以上拷貝的CpG核苷酸序列通過酶切位點插入到PCMV序列和FlaB3編碼基因之間。

作為優選，所述單個或兩個以上拷貝的CpG核苷酸序列的5’端設置有起始密碼子，比如ATG。當CpG序列的拷貝數為兩個以上時，所述兩個以上拷貝的CpG核苷酸序列直接通過3’和5’端連接；在本發明具體實施方式中，所述CpG核苷酸序列的拷貝數為2。

在本發明具體實施方式中，所述CpG核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；同時，本發明還具體提供了一種進行CpG修飾的序列，其組成形式為酶切位點+起始密碼子ATG+兩個拷貝的CpG序列+酶切位點，其中的酶切位點可根據真核質粒的選擇而確定，比如選擇pcDNA3質粒時，酶切位點為BamH1位點。

本發明在梅毒螺旋體模型小鼠中評估了上述未經修飾的質粒DNA(pcDNA3/FlaB3)和經CpG修飾的質粒DNA(pcDNA3/CpG-FlaB3)抑制梅毒螺旋體的保護性。脾細胞的細胞因子分析表明，兩者均可引起Th1型細胞免疫，其中CpG修飾的質粒DNA可引起某些體液抗體和鞭毛蛋白特異性脾細胞增殖。此外，通過檢測脾細胞分泌細胞因子TNF-α表明，兩者均可引起先天免疫應答，但CpG修飾的質粒DNA可引起更有效的先天免疫應答。

同時，在血液，淋巴結，脾臟，肝臟，睪丸和腦中檢測到的細菌器官負荷以及免疫小鼠細胞因子譜的變化表明，受刺激的免疫細胞能夠抑制蒼白球菌接種到遠端感染部位，這可能是誘導Th-1型免疫反應的結果。免疫組織化學分析和鼠淋巴結轉染實驗表明，用經CpG修飾的質粒DNA免疫的小鼠顯示出相對未經修飾的質粒DNA更好的免疫保護作用。