[發(fā)明專利]小分子DNA純化試劑

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• 申請日: 2019-04-12
• 公開（公告）號: CN109897851A
• 公開（公告）日: 2019-06-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄧文生;彭飛霞;吳自輝
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢科技大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 成都方圓聿聯(lián)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 51241
• 代理人: 曹少華

本發(fā)明公開了一種小分子DNA純化試劑，由試劑A和試劑B兩種獨立的試劑構(gòu)成，其中，其中試劑A為飽和碘化鈉水溶液(pH 6.0)，且其中含有0.5％質(zhì)量濃度的Na₂SO₃，試劑B為DNA洗滌液，配方為20mM pH 7.2的Tris.HCl、50mM KCl、85％乙醇。本發(fā)明的DNA純化試劑可同時替代PCR產(chǎn)物純化試劑盒和DNA膠抽提試劑盒中的試劑純化DNA或從瓊脂糖凝膠中抽提DNA,特別是對小分子DNA具有很好的純化效果，具有很大應(yīng)用價值和市場前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于化學試劑領(lǐng)域，具體涉及一種小分子DNA純化試劑。

背景技術(shù)

基因克隆是現(xiàn)代分子生物學中最頻繁使用的技術(shù)手段之一，廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)，醫(yī)學，生物研究，生物制藥等領(lǐng)域。基因克隆是將酶切后的目的基因(或DNA片段)與相同的酶酶切的載體在DNA連接酶的作用下進行連接，然后將重組DNA導入細菌宿主進行復制獲得大量重組DNA的過程。這一過程包括一系列的DNA操作技術(shù)，其中的關(guān)鍵步驟之一是DNA的純化,它對基因克隆效率起至關(guān)重要的作用。例如，利用聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)獲得的DNA需要純化以及酶切后的產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后也需要純化。目前，在研究中，常常利用商業(yè)試劑盒如PCR純化試劑盒和DNA膠抽提試劑盒對DNA進行純化。

PCR純化試劑盒和DNA膠抽提試劑盒常用于分子生物學和基因工程研究領(lǐng)域并加快基因的克隆效率。這些試劑盒被設(shè)計和生產(chǎn)成一次性使用的商品，主要原因之一是因為試劑盒中的試劑配方不為用戶所知。在現(xiàn)有的技術(shù)中，PCR產(chǎn)物純化和DNA膠抽提是分別利用PCR純化試劑盒和DNA膠抽提試劑盒完成，現(xiàn)有的PCR試劑盒和DNA膠抽提試劑盒純化小分子DNA效率很低，很難獲得足夠DNA滿足基因克隆的要求，影響研究的效率，浪費時間和人力。PCR純化試劑盒和DNA膠抽提試劑盒包含各自的試劑，是兩種不同的試劑盒，購買兩種試劑盒不僅增加研究成本，也產(chǎn)生大量實驗室垃圾，對環(huán)境造成負擔。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題為：如何提供一種小分子DNA純化試劑，解決現(xiàn)有的PCR純化試劑盒和DNA膠抽提試劑盒對小分子DNA純化效率低的問題。

本發(fā)明的技術(shù)方案為：小分子DNA純化試劑，由試劑A和試劑B兩種獨立的試劑構(gòu)成，其中，其中試劑A為飽和碘化鈉水溶液(pH 6.0)，且其中含有0.5％質(zhì)量濃度的Na₂SO₃，試劑B為DNA洗滌液，配方為20mM pH 7.2的Tris.HCl、50mM KCl、85％乙醇。

進一步地，試劑A的配置方法如下：

(1)在電子天平中稱量210克NaI,將稱量好的NaI置于500毫升燒杯中；

(2)取100毫升蒸餾水，在50℃水浴鍋中加熱，加入燒杯中溶解NaI,充分攪拌最大限度的溶解NaI，直至仍有少量NaI固體未還完全溶解，室溫靜置1小時；

(3)用濃鹽酸調(diào)整溶液pH值至6.0，靜置過夜，將上清轉(zhuǎn)移至無菌試劑瓶中；

(4)加入0.5克亞硫酸鈉(Na₂SO₃)固體至溶液中讓其充分溶解，防止飽和NaI氧化變色；

(5)將溶液用0.45μM過濾器滅菌并保存在避光的容器中。

進一步地，試劑B的配置方法如下：

(1)按照常規(guī)方法配制1M Tris.HCl(pH 7.2)母液；

(2)在電子天平中稱量0.373克KCl，置于250毫升試劑瓶中；

(3)向試劑瓶中加2毫升1M Tris.HCl(pH7.2)母液；

(4)向試劑瓶中加13.0毫升蒸餾水將KCl徹底溶解；