[發明專利]肺癌突變位點的突變率的檢測方法及試劑盒

在審

• 申請號: 201910291054.0
• 申請日: 2017-10-24
• 公開（公告）號: CN110117653A
• 公開（公告）日: 2019-08-13
• 發明（設計）人: 張曉妮;劉園園
• 申請（專利權）人: 深圳海普洛斯醫學檢驗實驗室
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6858
• 代理公司: 深圳舍穆專利代理事務所(特殊普通合伙) 44398
• 代理人: 黃賢炬

本發明公開一種肺癌突變位點的突變率的檢測方法，其包括：(1)對肺癌患者外周血的血漿樣本進行cfDNA的提取，獲得cfDNA提取物；(2)針對肺癌相關的EGFR L858R位點設計第一突變型檢測探針(序列為SEQ ID NO:5)和第一野生型檢測探針(序列為SEQ ID NO:6)、第一引物(序列為SEQ ID NO:1)和第二引物(序列為SEQ ID NO:2)，并且針對肺癌相關的EGFR 19號外顯子缺失位點設計第二突變型檢測探針(序列為SEQ ID NO:7)、第二野生型檢測探針(序列為SEQ ID NO:8)、第三引物(序列為SEQ ID NO:3)和第四引物(序列為SEQ ID NO:4)；(3)以cfDNA提取物為模板，進行ddPCR檢測，獲得含有敏感性突變位點的擴增產物；(4)對擴增產物進行數據分析，獲得EGFR敏感性突變L858R和19Del的突變率。由此，能夠靈敏地獲得EGFR敏感性突變L858R和19Del的突變率。

本申請是申請日為2017年10月24日、申請號為201711003578.2、發明名稱為一種肺癌EGFR L858R和19Del的ddPCR檢測方法及應用的專利申請的分案申請。

技術領域

本發明涉及醫學和生物技術領域，具體涉及一種肺癌突變位點的突變率的檢測方法及試劑盒。

背景技術

肺癌是最常見的肺原發性惡性腫瘤，絕大多數肺癌起源于支氣管粘膜上皮，故亦稱支氣管肺癌。近50多年來，世界各國特別是工業發達國家，肺癌的發病率和死亡率均迅速上升，是全世界發病率和死亡率最高的惡性腫瘤，5年生存率僅為16.8％，每年新確診肺癌患者達到160萬，肺癌同時也是癌癥患者死亡的首要病因，每年有140萬人口死于肺癌。

目前，傳統的肺癌治療方式有：外科手術治療、放療和化療等。外科手術治療雖然可以切除腫瘤，但是手術過程中可能無法完全切除或引起腫瘤轉移，還可能造成器官損傷及身體免疫力降低；化療是一種全身性的治療，效果明顯和迅速，但是在殺傷腫瘤細胞的同時也可能會把正常細胞一起殺滅，所以，化療算得上是一種“玉石俱焚”的治療方法；放療在某些腫瘤方面可以達到手術切除的效果，但放療成本高，周期長，并發癥也較多。

靶向治療作為一種新興治療手段，由于其毒性小，副作用少并且能夠大大提升患者生存周期以及生活質量而得到廣泛的應用。然而靶向藥物的選擇依賴于患者的基因分型，靶向藥物往往有其對應的靶基因，當該基因發生突變時某條調控細胞增殖分裂的信號通路被持續激活，或者是調控細胞凋亡的信號通路被抑制，當使用相應的靶向藥物之后，該通路被阻斷，腫瘤細胞被殺死。因此針對肺癌的靶基因以及其驅動基因的檢測技術的開發是應用靶向治療的基礎。

表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)是靶向治療的重要作用靶點，目前針對EGFR的靶向藥物包括EGFR抗單克隆抗體藥愛必妥、帕尼單抗，以及EGFR酪氨酸激酶抑制劑易瑞沙和特羅凱。其中，針對酪氨酸激酶抑制劑靶向藥物的使用還要參照EGFR酪氨酸激酶抑制劑敏感性突變，最常見的敏感性突變包括EGFR L858R突變和EGFR 19Del。這些突變使患者對EGFR-TKI(tyrosine kinase inhibitor，酪氨酸激酶抑制劑)敏感，對肺癌患者靶向藥物的選擇具有指導意義，如果野生型患者采用EGFR-TKI治療，會增加41％疾病進展風險的概率。因此，檢測EGFR基因突變情況，篩查獲益人群，將大大提高藥物的效率并節約資源。

腫瘤的治療效果與腫瘤的早期發現有很大的關系，由于肺癌腫瘤細胞倍增時間短、進展快，非小細胞肺癌患者中，約75％的患者發現時已處于中晚期，5年生存率很低，因此肺癌檢出越早越有利于治療，因此研發一種為肺癌早期診斷提供參考信息的檢測技術迫在眉睫。