[發明專利]分泌沙丁胺醇單克隆抗體的雜交瘤細胞株、單克隆抗體及應用

有效

• 申請號: 201910290758.6
• 申請日: 2019-04-11
• 公開（公告）號: CN110004117B
• 公開（公告）日: 2021-03-09
• 發明（設計）人: 邊超;姚譞;戴立言;馬慶偉;廖金旭;嚴羽萍;梁偉成
• 申請（專利權）人: 中抗生物醫藥（杭州）有限公司
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/44;G01N33/577
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 黃歡娣;邱啟旺

本發明公開了一種可以特異性結合沙丁胺醇的高親和力單克隆抗體及其可變區氨基酸序列。本發明還提供了一株可以產生上述單克隆抗體的雜交瘤細胞系(沙丁S?846?10)。本發明所述抗體具有特異性識別并結合沙丁胺醇抗原的能力，可用于沙丁胺醇的檢測。

技術領域

本發明涉及一株特異性結合沙丁胺醇的高親和力單克隆抗體及其可變區氨基酸序列，以及分泌該抗體的細胞株和應用。

背景技術

沙丁胺醇(salbutamol)是一種短效β2腎上腺素受體激動劑，用作平喘藥，能有效地抑制組胺等致過敏性物質的釋放，防止支氣管痙攣。適用于支氣管哮喘、喘息性支氣管炎、支氣管痙攣、肺氣腫等癥。添加微量沙丁胺醇于牲畜飼料內，可以增加牲畜的瘦肉量及換肉率、減少脂肪，但是其毒性遠高于具有相同功能的萊克多巴胺。

近年來，我國發現或查處的沙丁胺醇違法添加案件仍時有發生，嚴重影響了我國畜牧業發展，破壞了行業信譽，并對人民群眾身體健康造成了潛在危害。隨著國家對食品安全日益重視，不斷加大違法違規行為打擊力度，沙丁胺醇違法添加行為已大有收斂，整治效果顯著。

目前，國家及行業標準規定的沙丁胺醇權威檢測方法為液相色譜-質譜技術。此方法靈敏度高、特異性強，可靠性好；但是依賴大型儀器，操作繁瑣費時，成本較高，不能廣泛推廣使用。另外，基于抗原-抗體特異性結合的免疫學分析技術也可以被用于沙丁胺醇的檢測，該方法靈敏度、特異性較好，不依賴于大型儀器，操作方便、時間短、成本低，是一種易于現場即時使用的檢測技術。目前市場上有基于免疫層析等方法的多種沙丁胺醇檢測試劑或試紙卡片在售。

基于免疫反應的檢測方法核心是特異性識別沙丁胺醇的單克隆抗體，該抗體的結合靈敏度和特異性決定了檢測試劑盒的質量，因此好的抗沙丁胺醇單克隆抗體的研制是該類檢測試劑盒開發的關鍵前提。

發明內容

本發明提供了一株可以分泌特異性識別并高親和力結合沙丁胺醇的單克隆抗體的細胞株。命名為雜交瘤細胞株沙丁S-846-10。該細胞株于2018年7月17日保藏于中國典型培養物保藏中心(CCTCC)，保藏單位地址為中國·武漢·武漢大學，保藏號為CCTCC NO：C2018154。

本發明還提供了上述細胞株分泌的可以特異性識別并高親和力結合沙丁胺醇的單克隆抗體。

所述的單克隆抗體的可變區氨基酸序列包括如SEQ ID NO.1所示的重鏈和SEQ IDNO.2所示的輕鏈：

SEQ ID NO.1：

EVQLQQSGPGLVKPSQSLSLTCTVTGNSITSDHAWNWIRQFPGNKLEWMGNINYSGRTSYNPSLKSRLSITRDTSKNQFFLQLNSVTNEDTATYFCTVDDWYFEVWGAGTTVTVSS

SEQ ID NO.2：

NIMMTQSPSSLAVSAGEKVTMRCQSSQSLLYSSNQKNFLAWYQQKPGQSPELLIYWASTRASDVPDRFTGSGSGTDFNLTISSVQAADLAVYYCLQYLSSRTFGGGTKLELK

本發明還提供了上述細胞株或抗體在制備沙丁胺醇檢測試劑盒中的應用，進行沙丁胺醇含量測定。

相比于現有技術，本發明的有益效果在于：首次獲得高效結合沙丁胺醇抗原的單克隆抗體可變區基因序列，為后續抗體試劑應用于檢測試劑盒時采用規模化表達生產提供了序列基礎。

附圖說明

圖1抗沙丁胺醇ELISA效價檢測。

圖2可變區cDNA的5’race PCR結果，紅色箭頭表示目的片段。M：分子量標記；1：輕鏈可變區；2：重鏈可變區。

具體實施方式