[發明專利]一種豬腹膜間皮細胞的培養方法

有效

• 申請號: 201910282885.1
• 申請日: 2019-04-09
• 公開（公告）號: CN109810939B
• 公開（公告）日: 2023-05-09
• 發明（設計）人: 劉宇;邱銀生;趙文華;徐健峰
• 申請（專利權）人: 武漢輕工大學
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 深圳市世紀恒程知識產權代理事務所 44287
• 代理人: 胡海國

本發明公開一種豬腹膜間皮細胞的培養方法，涉及細胞培養技術領域。所述豬腹膜間皮細胞的培養方法包括以下步驟：將清理后的腹膜平鋪于培養皿中進行酶解消化，得原代細胞懸液；將所述原代細胞懸液離心，保留沉淀物，并將所述沉淀物用原代培養液重懸，篩選得原代細胞；其中，所述原代培養液包含15％～20％(v/v)胎牛血清、79％～85％(v/v)DMEM/F?12基礎培養基、0.8％～1.1％(v/v)青鏈霉素混合液、0.03～0.05％(v/v)EGF以及0.05％～0.12％(v/v)ITS。本發明旨在提供一種適用于豬腹膜間皮細胞的培養方法。

技術領域

本發明涉及細胞培養技術領域，特別涉及一種豬腹膜間皮細胞的培養方法。

背景技術

腹膜組織是一層覆蓋于腹腔臟器及腹腔的壁層的半透膜，由結締組織和其表面覆蓋一層間皮細胞組成，結締組織中包含血管、淋巴管和脂肪等組織。目前研究腹膜的相關文章集中于腹膜纖維化和腹膜透析領域，對腹膜間皮細胞的研究較少，且大多是人、大鼠和小鼠的相關研究，對豬的腹膜和腹膜間皮細胞研究極少。

目前，培養豬腹膜間皮細胞多是采用人、大鼠或小鼠的腹膜間皮細胞培養方法，然而，由于機體差異，這些方法并不完全適用于豬。采用這些培養方法培養豬腹膜間皮細胞，容易出現原代豬腹膜間皮細胞形態不穩定、雜細胞多、細胞獲得率低、培養時間長等缺陷。因此，急需找到一種適用于豬腹膜間皮細胞的培養方法。

發明內容

本發明的主要目的是提出一種豬腹膜間皮細胞的培養方法，旨在提供一種適用于豬腹膜間皮細胞的培養方法。

為實現上述目的，本發明提出了一種豬腹膜間皮細胞的培養方法，所述豬腹膜間皮細胞的培養方法包括以下步驟：

將清理后的腹膜平鋪于培養皿中進行酶解消化，得原代細胞懸液；

將所述原代細胞懸液離心，保留沉淀物，并將所述沉淀物用原代培養液重懸，篩選得原代細胞；

其中，所述原代培養液包含DMEM/F-12基礎培養基、15％～20％(v/v)胎牛血清、0.8％～1.1％(v/v)青鏈霉素混合液、0.03～0.05％(v/v)EGF以及0.05％～0.12％(v/v)ITS。

優選地，將所述原代細胞懸液離心，保留沉淀物，并將所述沉淀物用原代培養液重懸，篩選得原代細胞的步驟之后，還包括：

待所述原代細胞密度達到80％～90％時，使用傳代培養液對所述原代細胞進行傳代，得傳代細胞；

其中，所述傳代培養液包含DMEM/F-12基礎培養基、10％～15％(v/v)胎牛血清、0.8％～1.1％(v/v)青鏈霉素混合液、0.03～0.05％(v/v)EGF以及0.05％～0.12％(v/v)ITS。

優選地，將清理后的腹膜平鋪于培養皿中進行酶解消化，得原代細胞懸液的步驟之前，還包括：

取豬的腹膜，清除掉所述腹膜表面殘余的脂肪，于無菌環境下，用PBS反復沖洗所述腹膜的正反面，得清理后的腹膜。

優選地，將清理后的腹膜平鋪于培養皿中進行酶解消化，得原代細胞懸液的步驟包括：

將清理后的腹膜平鋪于培養皿中，加入胰酶-EDTA細胞消化液使所述腹膜被完全浸沒，于恒溫培養震蕩器中消化20～30min，得消化液；

向所述消化液中加入胎牛血清終止消化，棄去所述腹膜，得原代細胞懸液；

其中，所述胎牛血清的加入量為所述胰酶-EDTA細胞消化液的加入量的15％～20％(v/v)。

優選地，將所述原代細胞懸液離心，保留沉淀物，并將所述沉淀物用原代培養液重懸，篩選得原代細胞的步驟包括：