[發明專利]一種巴斯德畢赤酵母及其應用

在審

• 申請號: 201910281043.4
• 申請日: 2019-04-09
• 公開（公告）號: CN111793568A
• 公開（公告）日: 2020-10-20
• 發明（設計）人: 李俊;李慧;章漳;蔣丹丹
• 申請（專利權）人: 伽藍（集團）股份有限公司
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;C12N1/38;C12P21/02;C07K14/78;A61K8/9728;A61Q19/00;C12R1/84
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 薛琦;呂學辰

本發明公開了一種巴斯德畢赤酵母及其應用。所述的巴斯德畢赤酵母的保藏編號為CCTCC NO:M 2016763。本發明的巴斯德畢赤酵母菌株的多肽表達量同現有技術中的同種菌株相比有大幅提高，提高幅度可達36.32％。另外，本發明中的巴斯德畢赤酵母的表達產物對于緊密連接蛋白ZO?1、層粘連蛋白和纖連蛋白的表達量具有明顯的增強作用，可用于緊密連接蛋白ZO?1、層粘連蛋白和纖連蛋白的基因表達上調劑的制備。

技術領域

本發明屬于微生物領域，具體涉及一種巴斯德畢赤酵母及其應用。

背景技術

太空育種主要是通過強輻射，微重力和高真空等太空綜合環境因素誘發生物的基因變異。一方面太空環境存在著誘發生物突變的多種因素，太空誘變育種是有效的育種手段，能夠大大縮短新品種的研發周期。另一方面，空間環境對微生物的形態結構、生長速率、代謝活動、基因表達等都會產生重要影響。微生物體積小，培養條件簡單，相對于高等生物更容易引起變異，是空間生物學研究中較好的材料。

酵母菌是一類群體龐大的單細胞真核微生物。目前，酵母表達系統是常用的真核表達系統之一，已廣泛用于外源基因的表達，在蛋白藥物開發應用方面具有廣闊前景，如類胰島素生長因子、人血清白蛋白等已經用于臨床治療。酵母表達系統表達外源基因的優點在于：既具有原核生物生長快、培養成本低、遺傳操作簡單的特點，又有哺乳類細胞的翻譯后加工和修飾功能，如二硫鍵的形成、蛋白磷酸化、糖基化等，因此利用酵母表達系統有利于保持生物產品的活性和穩定性；不會產生毒素，安全可靠；能分泌表達，有利于純化。巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)能利用甲醇作為碳源，其是優良的外源基因表達系統，在生物制藥領域有廣泛應用，是近年來被公認的最有效的外源蛋白表達系統之一。

雖然目前有多個菌種進行過空間搭載，但并沒有針對巴斯德畢赤酵母這一優良的基因工程表達系統進行空間誘變的研究。空間環境是否能提高巴斯德畢赤酵母的外源基因表達水平還有待探索，空間作用的生化和分子生物學機制，包括是否從轉錄因子、調節蛋白等方面誘導巴斯德畢赤酵母中基因的差異表達，也還沒有進行深入探討和闡釋。

另外，緊密連接蛋白、層粘連蛋白和纖連蛋白三種蛋白在皮膚的表皮層、真表皮連接處和真皮層有表達，隨著年齡的增長，該三種蛋白中的一種或多種表達量均有下降，從而造成皮膚上皺紋的增加。然而迄今為止，現有技術中可以同時增強這三種蛋白表達的物質鮮少有報道。

發明內容

本發明要解決的技術問題是針對現有技術中缺乏提高緊密連接蛋白ZO-1、層粘連蛋白和/或纖連蛋白的基因表達的物質的缺陷，提供一種巴斯德畢赤酵母及其應用。本發明的巴斯德畢赤酵母菌株的多肽表達量同現有技術中的同種菌株相比有大幅提高，提高幅度可達36.32％。另外，本發明中的巴斯德畢赤酵母的表達產物對于緊密連接蛋白ZO-1、層粘連蛋白(尤其是層粘連蛋白332)和纖連蛋白的表達量具有明顯的增強作用，可用于緊密連接蛋白ZO-1、層粘連蛋白和纖連蛋白的基因表達上調劑的制備。

發明人選取出發菌株，即搭載前航天酵母(JBA-SP02-CK-01-Gly-01)，其專利保藏編號為CGMCC NO:13476，通過“實踐十號”實驗衛星平臺，利用空間誘變的手段對出發菌株SP02-CK-01進行太空環境誘變改造，意外獲得寡肽表達水平高、活性好、純度高的誘變菌株SP02-DZ-08，即二代航天酵母(JBA-SP02-DZ-08-Gly-01)，保藏編號為CCTCC NO:M2016763。發明人意外發現該巴斯德畢赤酵母發酵產物濾液可提高緊密連接蛋白ZO-1、層粘連蛋白和纖連蛋白的信號表達量，而該三種蛋白可從皮膚的表皮層、真表皮連接處和真皮層三個層面來全面加強結合緊密度，增強皮膚細胞的“連接結合-溝通交流-運輸”，因而航天酵母發酵產物濾液具有良好的護膚功效。

本發明解決上述技術問題的技術方案之一為：一種巴斯德畢赤酵母(Pichiapastoris)，其保藏編號為CCTCC NO:M 2016763。