[發明專利]一種檢測TIM-3抗體活性的試劑盒和方法

有效

• 申請號: 201910279725.1
• 申請日: 2019-04-09
• 公開（公告）號: CN109975537B
• 公開（公告）日: 2022-05-24
• 發明（設計）人: 潘雋;聶思惟;吳瓊;劉靜靜;萬雅莉;郭新東;鄭勇;李競
• 申請（專利權）人: 上海藥明生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533;G01N33/535;G01N33/543;G01N33/577
• 代理公司: 北京安杰律師事務所 11627
• 代理人: 楊劍;孫秀武

本發明提供了一種檢測TIM?3抗體活性的試劑盒和方法，其中包括表面上展示TIM?3抗原或其功能片段以及報告基因基團的免疫細胞，以及包括與CD?3抗體交聯的微珠。通過混合所述免疫細胞、所述微珠、TIM?3抗體，檢測報告基因基團的活性進而判斷TIM?3抗體活性。該方法操作簡單、靈敏度高、重復性好。

技術領域

本發明涉及生物醫藥領域，具體涉及一種檢測TIM-3抗體活性的試劑盒和方法。

背景技術

T細胞免疫球蛋白及粘蛋白域蛋白.3(T cell immunoglobulin domain andmucin domain-3，簡稱TIM-3)作為一個關鍵免疫檢查點分子，廣泛存在于Th-1輔助T細胞、細胞毒性CD8⁺T細胞、樹突細胞、單核細胞、自然殺傷細胞等細胞的表面，在與其配體結合后會對免疫功能起到調節作用。現有大量研究表明，TIM-3在腫瘤引起的免疫抑制過程中起到重要作用。

T細胞的激活一般需要第一信號與第二信號同時存在。第一信號為CD3/TCR(T細胞受體)復合物與抗原呈遞細胞(APC)或是其他細胞表面的抗原/MHC(主要組織相容性抗原)復合物結合后產生。第二信號為共刺激信號，主要為T細胞表面的CD28與APC表面的CD80/86結合后產生。已有文獻報道，TIM-3可以通過與TCR下游的Src激酶，包括Fyn和Lck，相互作用后抑制T細胞的免疫響應，例如IL-2分泌。

目前針對TIM-3抗體的免疫細胞例如T細胞活性功能檢測需要使用原代的免疫細胞，材料來源受限同時實驗流程非常復雜，整體實驗通常需要5-7天，實驗本身的重復性也較差。

因此，亟需一種簡單易行且靈敏度高的檢測方法，本發明旨在解決該問題。

發明內容

本發明公開了一種試劑盒，其包含：

(i)免疫細胞，所述免疫細胞的細胞表面上展示TIM-3抗原或其功能片段，以及靶啟動子依賴性的報告基因基團；

(ii)微珠，所述微珠與CD-3抗體交聯。

在一個實施例中，所述試劑盒其進一步包括CD28抗體，其中所述CD28抗體優選為人源CD28抗體，所述CD28抗體的單次使用量為5ng至50000ng，例如，5ng、10ng、50ng、100ng、150ng、200ng、250ng、300ng、350ng、400ng、450ng、500ng、1000ng、2000ng、3000ng、4000ng、5000ng、10000ng、20000ng、30000ng、40000ng、50000ng，例如在濃度范圍為0.1μg/mL至10μg/mL，使用體積為50μL的倍數，這個實施例僅是用于解釋本發明，本領域技術人員應該容易理解抗體的使用濃度和體積可以根據實際進行調整。

在一個實施例中，所述免疫細胞包括但不限于T細胞、B細胞、NK細胞、樹突狀細胞、單核細胞、巨噬細胞、粒細胞、肥大細胞中的一種以上。

在一個具體實施例中，所述T細胞包括但不限于Jurkat細胞、HuT-78、CEM、Molt-4、MO、H9、MJ、TALL-104、Loucy、P116、J45.01、J.RT3-T3.5、MO、H9、MJ、TALL-104、Loucy、P116、J45.01、J.RT3-T3.5中的一種以上。

在一個實施例中，所述報告基因包括但不限于氯霉素乙酰轉移酶(cat)、β-半乳糖苷酶(LacZ)、葡萄糖醛酸酶(GUS)、二氫葉酸還原酶、熒光素酶諸如螢火蟲熒光素酶(firefly Luciferase)、NanoLuc^TM螢光素酶、海腎螢光素酶(Renilla Luciferase)、叩頭蟲熒光素酶(beetle luciferase)、分泌型堿性磷酸酶(SEAP)、熒光蛋白家族諸如綠色熒光蛋白(GFP)、藍色熒光蛋白(BFP)、增強型GFP(EGFP)和去穩定EGFP、紅色熒光蛋白(RFP)中的一種以上。