[發(fā)明專(zhuān)利]一種獲得非轉(zhuǎn)基因耐儲(chǔ)存鮮食枸杞的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910276123.0
• 申請(qǐng)日: 2019-04-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110004173B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-03-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張康;高崑;冉毅東
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 天津吉諾沃生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/82
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/82;C12N15/90;C12N15/60;C12N15/56;C12N15/55;C12N15/113;A01H5/00;A01H6/82
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 白艷

本發(fā)明公開(kāi)了一種獲得非轉(zhuǎn)基因耐儲(chǔ)存鮮食枸杞的方法。本發(fā)明提供了一種培育耐儲(chǔ)存鮮食枸杞的方法，包括如下步驟：抑制目的枸杞中果膠裂解酶基因的表達(dá)，從而使枸杞耐儲(chǔ)存；或抑制目的枸杞中果膠裂解酶的含量或活性，從而使枸杞耐儲(chǔ)存。枸杞鮮果的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值顯著高于干果，但貨架期短是限制鮮果銷(xiāo)售的主要原因。本方法相較于傳統(tǒng)育種技術(shù)能夠快速地獲得耐儲(chǔ)存的新品種。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)育種領(lǐng)域，涉及一種獲得非轉(zhuǎn)基因耐儲(chǔ)存鮮食枸杞的方法，特別涉及一種利用基因組編輯技術(shù)定點(diǎn)突變寧夏枸杞果膠裂解酶相關(guān)基因，獲得枸杞耐儲(chǔ)存育種材料的方法。

背景技術(shù)

枸杞(Lycium barbarumL.)是我國(guó)重要的藥用植物資源。含枸杞多糖、甜菜堿、枸杞色素等，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)證明枸杞具有廣泛的藥用價(jià)值。此外枸杞耐干旱，適宜沙地生長(zhǎng)，因此可作為水土保持的灌木，又由于其耐鹽堿，成為鹽堿地開(kāi)樹(shù)先鋒。

枸杞鮮果的各種營(yíng)養(yǎng)成分均比干果高，已經(jīng)逐漸成為受消費(fèi)者喜愛(ài)的時(shí)令果品。鮮食枸杞具備果粒大、皮薄肉厚、籽少味甘。但枸杞鮮果為漿果，水分含量高達(dá)80％，且富含糖分，果實(shí)采收后變質(zhì)的速度快，極易霉?fàn)€，果實(shí)供應(yīng)期及貨架期很短，難以滿足市場(chǎng)需求。皮薄肉厚雖改良了口感，卻增加了貯藏及運(yùn)輸過(guò)程的困難。使得枸杞鮮果的銷(xiāo)售成本很高，風(fēng)險(xiǎn)極大。

發(fā)明內(nèi)容

為了獲得非轉(zhuǎn)基因耐儲(chǔ)存鮮食枸杞，本發(fā)明提供了如下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了一種培育耐儲(chǔ)存鮮食枸杞的方法，包括如下步驟：

抑制目的枸杞中果膠裂解酶基因的表達(dá)，從而使枸杞耐儲(chǔ)存；

或抑制目的枸杞中果膠裂解酶的含量或活性，從而使枸杞耐儲(chǔ)存。

上述方法中，所述果膠裂解酶為如下(a1)或(a2)或(a3)：

(a1)序列表的序列3所示的蛋白質(zhì)；

(a2)將(a1)經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白質(zhì)；

(a3)與(a1)具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同一性且具有相同功能的蛋白質(zhì)。

上述方法中，所述果膠裂解酶基因?yàn)槿缦?b1)-(b4)中任一種：

(b1)編碼區(qū)如序列表的序列1所示的DNA分子；

(b2)編碼區(qū)如序列表的序列2所示的DNA分子；

(b3)在嚴(yán)格條件下與(b1)或(b2)限定的DNA分子雜交且編碼果膠裂解酶的DNA分子；

(b 4)與(b1)或(b2)具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同一性且編碼果膠裂解酶的DNA分子。

上述方法中，所述抑制枸杞中果膠裂解酶基因的表達(dá)或抑制枸杞中果膠裂解酶的含量或活性均是通過(guò)CRISPR/Cas9系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)。

上述方法中，所述CRISPR/Cas9系統(tǒng)包括sgRNA和Cas9蛋白；

或所述CRISPR/Cas9系統(tǒng)包括表達(dá)sgRNA和Cas9蛋白的質(zhì)粒；

所述sgRNA的靶序列為如下(c1)或(c2)：

(c1)序列表的序列7所示的核酸分子；

(c2)與(c1)具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同一性的核酸分子。

或所述通過(guò)CRISPR/Cas9系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)為將所述sgRNA和所述Cas9蛋白導(dǎo)入目的枸杞中。