[發(fā)明專利]基于外周血的肺癌早篩用的試劑盒

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• 申請日: 2017-06-07
• 公開（公告）號: CN110452981A
• 公開（公告）日: 2019-11-15
• 發(fā)明（設計）人: 張曉妮;劉園園;溫媛
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳市海普洛斯生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6869
• 代理公司: 44398 深圳舍穆專利代理事務所(特殊普通合伙)
• 代理人: 黃賢炬<國際申請>=<國際公布>=<進入

1.一種基于外周血的肺癌早篩用的試劑盒，其特征在于，

包括：

接頭，其包括Tag序列、Poly N序列、第一發(fā)夾序列、第二發(fā)夾序列、第一索引序列、第一通用引物結(jié)合序列、第二通用引物結(jié)合序列和dUTP，所述第一索引序列用于區(qū)分不同外周血樣本；

PCR引物，其是針對肺結(jié)節(jié)相關且間接影響著細胞的增殖分化的358個基因而設計的引物，所述PCR引物用于與所述接頭結(jié)合；以及

捕獲探針，其是針對肺結(jié)節(jié)相關且間接影響著細胞的增殖分化的358個基因而設計的探針，所述捕獲探針用于所述外周血樣本中的血漿的cfDNA的區(qū)域捕獲。

2.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：

所述Tag序列為ACTG，所述Poly N序列為NNNNNNNNNNNN，所述第一發(fā)夾序列為AGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC，所述第二發(fā)夾序列為ATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT，所述第一索引序列為XXXXXXXX，所述第一通用引物結(jié)合序列為TAGAGCATACGGCAGAAGACGAAC，所述第二通用引物結(jié)合序列為AATGATACGGCGACCACCGAG。

3.如權(quán)利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于：

所述接頭包含核苷酸序列：5’-P-ACTGNNNNNNNNNNNNAGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACXXXXXXXXTAGAGCATACGGCAGAAGACGAACUAATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT-3’。

4.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：

在所述接頭中，所述第一發(fā)夾序列與所述第二發(fā)夾序列形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)。

5.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：

所述Poly N序列為隨機堿基序列，并且所述第一索引序列為8bp的隨機序列。

6.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：

所述PCR引物包括針對EGFR基因L858R位點設計的正向引物和反向引物，所述正向引物序列為SEQ ID NO:2，所述反向引物序列為SEQ ID NO:3。

7.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：

所述捕獲探針包括針對EGFR基因18號外顯子設計的上游探針和下游探針，所述上游探針的序列為SEQ ID NO:4，所述下游探針的序列為SEQ ID NO:5。

8.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：

還包括經(jīng)鏈霉親和素處理的磁珠，并且所述捕獲探針的3’端具有生物素標記。

9.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：

所述358個基因包括：與肺癌細胞增殖分化相關的驅(qū)動基因、抑制肺癌細胞生長增殖的抑癌基因、肺癌信號通路相關基因，肺部其他腫瘤相關基因，以及與良性腫瘤相關的基因。

10.如權(quán)利要求9所述的試劑盒，其特征在于：

所述358個基因包括：35個與肺癌細胞增殖分化相關的驅(qū)動基因、41個抑制肺癌細胞生長增殖的抑癌基因、89個肺癌信號通路相關基因，124個肺部其他腫瘤相關基因，以及69個與良性腫瘤相關的基因。