[發(fā)明專利]一種擴(kuò)展青霉及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910266427.9
• 申請(qǐng)日: 2019-04-03
• 公開（公告）號(hào): CN110055183B
• 公開（公告）日: 2020-09-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鮑文娜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江科技學(xué)院
• 主分類號(hào): C12N1/14
• 分類號(hào): C12N1/14;C12P7/46;C12R1/80
• 代理公司: 杭州浙科專利事務(wù)所(普通合伙) 33213
• 代理人: 沈淵琪

一種擴(kuò)展青霉及其應(yīng)用，屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明一方面提供了一種擴(kuò)展青霉(Penicillium expansum)WH?3，該菌株于2018年12月03日在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，保藏號(hào)為CGMCC No.16798，保藏單位地址為：北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)；本發(fā)明另一方面提供了該擴(kuò)展青霉在制備L(+)?酒石酸或其鹽中的應(yīng)用，為獲得L(+)?酒石酸或其鹽提供了新的方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種擴(kuò)展青霉及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

酒石酸有三種旋光異構(gòu)體，L(+)-酒石酸(右旋酒石酸)、D(-)-酒石酸(左旋酒石酸)和meso-酒石酸(內(nèi)消旋酒石酸)。L(+)-酒石酸廣泛存在于自然界中，故又被稱為“天然酒石酸”，在羅望子果和葡萄中含量較高，是重要的食品乳化劑、飲料酸味劑、醫(yī)藥拆分劑、石膏緩凝劑、印染防染劑、照相顯影劑、金屬拋光劑，廣泛應(yīng)用于食品工業(yè)、醫(yī)藥化工及建筑業(yè)中。微生物轉(zhuǎn)化法是目前L(+)-酒石酸工業(yè)化生產(chǎn)的主流方法，即以順酐為原料，通過水解和環(huán)氧化反應(yīng)變?yōu)轫樖江h(huán)氧琥珀酸或其鹽，然后利用含有順式環(huán)氧琥珀酸水解酶的微生物，催化順式環(huán)氧琥珀酸或其鹽生成L(+)-酒石酸或其鹽。

目前已報(bào)道的產(chǎn)L(+)-酒石酸的菌種有：諾卡氏菌屬(Nocardia)、棒桿菌屬(Coryncbacterium)、紅球菌屬(Rhodococcus)、根瘤菌屬(Rhizobium)、假單胞菌屬(Pseudomonas)、無色桿菌屬(Achromobacter)、醋酸桿菌屬(Acetobacter)、土壤桿菌屬(Agrobacterium)、產(chǎn)堿桿菌屬(Alcaligenes)、不動(dòng)桿菌屬(Acinetobacter)、克雷伯氏菌屬(Klebsiella)和雙頭菌(Labrys)。其中諾卡氏菌、棒狀桿菌和紅球菌是工業(yè)生產(chǎn)菌，其轉(zhuǎn)化率可達(dá)到90％以上，產(chǎn)酸130g/L以上。這些已報(bào)道的生產(chǎn)L(+)-酒石酸的菌種均為細(xì)菌，未見利用真菌生產(chǎn)L(+)-酒石酸的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明的目的在于設(shè)計(jì)提供一種擴(kuò)展青霉及其應(yīng)用的技術(shù)方案。

所述的一種擴(kuò)展青霉(Penicillium expansum)WH-3，該菌株于2018年12月03日在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，保藏號(hào)為CGMCC No.16798，建議的分類命名為：擴(kuò)展青霉Penicillium expansum，保藏單位地址為：北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)。

所述的一種擴(kuò)展青霉WH-3在制備L(+)-酒石酸或其鹽中的應(yīng)用。

所述的應(yīng)用，其特征在于包括以下步驟：

1)在斜面培養(yǎng)基中培養(yǎng)擴(kuò)展青霉WH-3，25℃培養(yǎng)7天至長(zhǎng)出濃密孢子，無菌生理鹽水懸浮孢子并振蕩混勻，用無菌的三層擦鏡紙過濾除去菌絲體；

2)過濾后的上述孢子液接種至種子培養(yǎng)基中，25℃振蕩培養(yǎng)24～36h，得到擴(kuò)展青霉種子液；

3)取上述擴(kuò)展青霉種子液轉(zhuǎn)接至產(chǎn)酶培養(yǎng)基中，25℃振蕩培養(yǎng)5天，獲得相應(yīng)的擴(kuò)展青霉細(xì)胞和發(fā)酵液，然后分別將得到的擴(kuò)展青霉細(xì)胞和發(fā)酵液加入到順式環(huán)氧琥珀酸或其鹽溶液中，30℃振蕩培養(yǎng)，轉(zhuǎn)化5天，得到細(xì)胞轉(zhuǎn)化液和發(fā)酵液轉(zhuǎn)化液；

4)向兩種轉(zhuǎn)化液中分別加入過量的CaCl₂，得到酒石酸鈣沉淀，過濾并用蒸餾水沖洗酒石酸鈣沉淀，再用硫酸酸解酒石酸鈣沉淀，然后過濾后得到的酸解液經(jīng)過陰陽(yáng)離子交換精制、濃縮、結(jié)晶、烘干后得到L(+)-酒石酸或其鹽的成品。

所述的應(yīng)用，其特征在于所述的斜面培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基；所述的種子培養(yǎng)基為PDB培養(yǎng)基；所述的產(chǎn)酶培養(yǎng)基為YSM培養(yǎng)基。

所述的應(yīng)用，其特征在于所述的順式環(huán)氧琥珀酸鹽選用順式環(huán)氧琥珀酸鈉或順式環(huán)氧琥珀酸鉀。