[發(fā)明專利]一種檢測特發(fā)性無精癥的試劑盒及基因panel

在審

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• 申請日: 2019-04-01
• 公開（公告）號: CN109811052A
• 公開（公告）日: 2019-05-28
• 發(fā)明（設計）人: 孫斐;陳石濤;鄭小國;王貴栓
• 申請（專利權）人: 中國福利會國際和平婦幼保健院
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 上海卓陽知識產權代理事務所(普通合伙) 31262
• 代理人: 巫蓓麗

本發(fā)明涉及基因檢測技術領域，具體地說，是一種檢測特發(fā)性無精癥的試劑盒及基因panel。本發(fā)明利用患者少量(3ml)外周血提取DNA，經過建庫，高通量測序等過程對患者的基因突變進行檢測，并通過生物信息學分析，如突變頻率、突變性質、生物學危害性、保守性等進行評估，發(fā)現了30個新的患者致病的基因突變。本發(fā)明只需提取患者3ml外周血，即可進行檢測，且覆蓋了多達30個檢測位點，提高了突變的檢出率，30個位點在一個反應體系中進行，大大減少了工作量，提高了工作效率，節(jié)約了工作時間。

技術領域

本發(fā)明涉及基因檢測技術領域，具體地說，是一種檢測特發(fā)性無精癥的試劑盒及基因panel。

背景技術

無精子癥是引起男性不育的最嚴重的一種狀況，核心特征主要為射出精液中無精子存在，據統(tǒng)計大約影響著全球1％的男性。無精癥在病因上具有高度的異質性，眾多研究已證實遺傳異常是無精子癥的重要致病因素，約占所有無精癥病例的15％，已知病因包括Yq微缺失及Klinefelter綜合征等。2015年Yatsenko,A.N.及其同事等在散發(fā)無精癥患者群中發(fā)現TEX11罕見突變引起精子發(fā)生障礙，并在醫(yī)學研究頂級學術期刊《柳葉刀》發(fā)表了成果。同期，還有眾多研究，例如Fakhro,Khalid A及其同事等在6個近親婚配的家系內的無精癥患者兄弟中通過高通量全外顯子測序發(fā)現了SPO11,WNK3,NANOS2,TEX14及CCDC155導致生精障礙的罕見基因突變等。因此證實了部分基因的罕見突變可導致無精癥的發(fā)生，并且這些突變可以通過現有的測序技術發(fā)現。而目前臨床上針對無精子癥的檢查主要包括：精液常規(guī)，性激素檢查，陰囊超聲，遺傳學檢查主要包括：染色體核型檢查，Y染色體微缺失檢查。這些經典的檢查方法自20年前興起且鮮有更新，不可否認其具有良好的效力，但仍有大約72％的無精癥病例無法明確其具體病因，被稱為特發(fā)性無精癥，亟待發(fā)現新的分子診斷標記物。

隨著人類基因組測序計劃完成和高通量測序技術的發(fā)展，醫(yī)學領域的科研工作者對人類基因組有了更深入的認識，對疾病遺傳變異、致病基因的功能及作用機制的研究也逐漸深入。目前應用較為成熟的全外顯子組測序技術，是利用外顯子捕獲試劑盒捕捉整個基因的外顯子及其周邊區(qū)域的基因序列，然后進行高通量測序，因其花費小，產出數據率用率高的特點在各種遺傳疾病研究中嶄露頭角。近幾年來，因測序成本由近萬元大幅下降至錢百元水平，使得其作為臨床常規(guī)檢測成為可能。

中國專利文獻CN201580000582.6公開了一種檢測與特發(fā)性無精子癥相關的遺傳標記的試劑盒，該試劑盒包括引物對，上述遺傳標記位于AR基因的編碼區(qū)，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其中，所述序列的突變位點選自c.868T>C、c.1484G>A、c.1888C>T、c.569C>T、c.616A>G和c.1149C>T中的一個或多個；上述引物對的上游引物和下游引物分別位于上述突變位點的上游和下游。通過大規(guī)模測序在特發(fā)性無精子癥病人中篩選出了AR基因的6個新的突變位點，研究表明AR基因的上述突變可能導致特發(fā)性無精子癥的發(fā)生，從而能夠通過使用試劑盒檢測上述突變來實現對特發(fā)性無精子癥的診斷檢測。

中國專利文獻CN201510220417.3公開了一種用于男性無精癥診斷的試劑盒和使用方法。該試劑盒為用于測定血漿miR-15b的不同表達水平的生物標志物檢測試劑，通過miR-15b的過高表達提示無精癥，發(fā)現了一種在精子發(fā)生過程中起重要作用的微小RNA基因miR-15b，miR-15b在男性不育病人中的表達差異，并且可以在血漿中檢測到其表達的顯著變化。試劑盒基于定量PCR的原理，結果重復性好，客觀準確，易于在不同的檢測機構與醫(yī)院檢驗科，男科實驗室等推廣。

但是關于本發(fā)明的檢測特發(fā)性無精癥的試劑盒及基因panel，目前還未見報道。

發(fā)明內容

本發(fā)明利用患者少量(3ml)外周血提取DNA，經過建庫，高通量測序等過程對患者的基因突變進行檢測，并通過生物信息學分析，如突變頻率、突變性質、生物學危害性、保守性等進行評估，發(fā)現了30個新的患者致病的基因突變。