[發(fā)明專利]一種卡介苗PhoPR基因過表達(dá)菌株的構(gòu)建及其用途

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• 申請日: 2019-03-29
• 公開（公告）號: CN110079490A
• 公開（公告）日: 2019-08-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張萬江;王洪洲;吳芳;吳江東;張杰;董江濤;柳小玲;朱薈云;趙正涌;趙彥恒;邵萌
• 申請（專利權(quán)）人: 石河子大學(xué)
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/74;C12R1/32
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本發(fā)明涉及構(gòu)建一種新型PhoPR基因過表達(dá)的卡介苗（BCG）突變菌株及其用途。首次將含有BCG過表達(dá)PhoPR基因的載體轉(zhuǎn)化入BCG，篩選并檢測確定成功轉(zhuǎn)化的菌株為新型PhoPR基因過表達(dá)的卡介苗（BCG）突變菌株。本發(fā)明涉及新型PhoPR基因過表達(dá)的卡介苗（BCG）突變菌株，即BCG：PhoPR菌株，該類菌株主要用于研究卡介苗PhoPR基因過表達(dá)的相關(guān)蛋白PhoPR在結(jié)核分枝桿菌在宿主內(nèi)的生長、耐藥性、滲透性調(diào)節(jié)、耐酸性、致病性等方面的作用，以及用于干預(yù)和治療結(jié)核病的新型疫苗開發(fā)和研究。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于重組基因，涉及一種卡介苗PhoPR基因過表達(dá)菌株的構(gòu)建及用途。本發(fā)明涉及疫苗研究領(lǐng)域，構(gòu)建卡介苗PhoPR基因過表達(dá)菌株，用于卡介苗PhoPR雙組份系統(tǒng)相關(guān)蛋白PhoP/R過表達(dá)對新型卡介苗突變菌株毒力強(qiáng)度、免疫保護(hù)作用等方面的研究潛在和疫苗開發(fā)。

背景技術(shù)

結(jié)核病是由結(jié)分枝核桿菌(Mycobacterium Tubercμlosis) 感染引起的一種世界性傳染病，也是單一致病菌感染導(dǎo)致死亡率最高的感染性疾病。目前結(jié)核病依然是全球感染性疾病的頭號殺手。2018年9月18日世界衛(wèi)生組織發(fā)布的《2018年全球結(jié)核病控制報告》公布的新數(shù)據(jù)顯示：2017年全球估計有1000萬人感染結(jié)核病，2013至2017年，全球結(jié)核病新增病例年均下降2%，2017年患病和死亡人數(shù)均為近年來低點，但結(jié)核病仍是全球最致命的傳染病。其中160萬人因結(jié)核病死亡，結(jié)核病新發(fā)病例，其中男性580萬，女性320萬例和兒童100萬。總體而言，90%為成年患者（≥15歲），9%為HIV感染者（其中非洲占72%），2/3結(jié)核病患者來自于以下8個國家：印度（27%）、中國（9%）、印度尼西亞（8%）、菲律賓（6%）、巴基斯坦（5%）、尼日利亞（4%）、孟加拉國（4%）和南非（3%）。在WHO 30個結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國家中，上述國家和其他22個國家結(jié)核病患者數(shù)占全球結(jié)核病患者數(shù)的87%。而WHO歐洲區(qū)域（3%）和美洲區(qū)域（3%）僅占全球結(jié)核病患者的6%。據(jù)估計，全球23%的人口（約17億）存在潛伏結(jié)核感染，因此他們一生中存有發(fā)展為活動性結(jié)核病的風(fēng)險。結(jié)核病疫情未能獲得控制，究其根本原因是缺乏有效的疫苗預(yù)防結(jié)核病的發(fā)生。

控制結(jié)核病的有效措施依然在于對結(jié)核病的有效預(yù)防，目前唯一應(yīng)用于臨床預(yù)防結(jié)核病的疫苗仍是卡介苗（bacille calmette-guerin，BCG），它是將牛型結(jié)核分枝桿菌不斷傳遞230代而得到的減毒活菌疫苗，自從1921年問世以來，全球有超過40億人次接種使用卡介苗每年約有1億名新生兒使用接種預(yù)防，成為世界上應(yīng)用最廣泛的疫苗。卡介苗培養(yǎng)簡單，價格低廉，其安全性相對較好，但在長期的應(yīng)用過程中人們逐漸發(fā)現(xiàn)它的缺點和不足：1.WHO認(rèn)為卡介苗的接種對于兒童嚴(yán)重結(jié)核病如結(jié)核性腦膜炎及粟粒型肺結(jié)核有較好的預(yù)防效果，但對成人結(jié)核病并無保護(hù)作用，但成年人是結(jié)核病的主要傳播來源，因此卡介苗接種也不能降低結(jié)核病傳播。2.保護(hù)效力并不穩(wěn)定，并有相對應(yīng)用禁忌癥及不良反應(yīng)。研究證實卡介苗對結(jié)核病的預(yù)防效果在不同地域不同人群差異較大，保護(hù)率為0～80%不等，因此有關(guān)卡介苗是否有效的爭議一直都存在。3.對于先天性免疫低下的兒童及后天獲得性免疫力缺陷患者在接種卡介苗后有可能導(dǎo)致嚴(yán)重的并發(fā)癥或播散性結(jié)核病；4.在長期的傳代過程中丟失一些重要抗原基因，免疫保護(hù)效力降低，另外接種卡介苗后還會對結(jié)核病患者的診斷結(jié)果產(chǎn)生一定的影響。

傳統(tǒng)的卡介苗已經(jīng)不能滿足人類預(yù)防結(jié)核病的需求，各研究人員均在不斷努力開發(fā)新型結(jié)核病疫苗。諸多新興結(jié)核病疫苗均處于不同受試階段，到目前為止仍沒有一種疫苗可以成功的替代卡介苗而廣泛應(yīng)用于臨床預(yù)防。結(jié)核分枝桿菌PhoPR雙組分系統(tǒng)是結(jié)核分枝桿菌12個雙組分系統(tǒng)中最為重要的雙組分系統(tǒng)。它可使結(jié)核分枝桿菌感應(yīng)外界環(huán)境變化，并做出相應(yīng)反應(yīng)的調(diào)控，同時對結(jié)核分枝桿菌在宿主體內(nèi)的生長、分化、代謝、毒力、致病性以及耐藥性等方面發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。