[發(fā)明專(zhuān)利]美洲大蠊多肽的制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910251549.0
• 申請(qǐng)日: 2019-03-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111748024A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-10-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 石小和
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 石小和
• 主分類(lèi)號(hào): C07K14/435
• 分類(lèi)號(hào): C07K14/435;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/34
• 代理公司: 深圳中一聯(lián)合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44414
• 代理人: 曹柳

本發(fā)明屬于多肽制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種美洲大蠊多肽的制備方法，包括：提供美洲大蠊，將美洲大蠊進(jìn)行脫脂處理，然后采用65％?85％乙醇水溶液作為提取液進(jìn)行成分提取，收集提取液，濃縮，獲得總提取物；將總提取物與水進(jìn)行混合均勻，過(guò)濾，收集濾液；將濾液上大孔樹(shù)脂柱進(jìn)行梯度洗脫，梯度洗脫采用的流動(dòng)相包括：水、70％?80％醇水溶液和至少一個(gè)質(zhì)量百分比濃度低于70％的醇水溶液，然后收集70％?80％醇水溶液的洗脫液，并濃縮至洗脫液體積的0.1倍以下，獲得濃縮液；將濃縮液與有機(jī)溶劑進(jìn)行混合，進(jìn)行萃取，收集有機(jī)溶劑萃取液，并將有機(jī)溶劑萃取液進(jìn)行結(jié)晶，收集晶體，干燥；有機(jī)溶劑為乙酸乙酯和石油醚的混合溶劑，且乙酸乙酯和石油醚的混合體積比為(1?5):1。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于多肽制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種美洲大蠊多肽的制備方法。

背景技術(shù)

美洲大蠊，為昆蟲(chóng)綱蜚蠊目蜚蠊科大蠊屬昆蟲(chóng)，俗稱(chēng)蟑螂，我國(guó)歷代本草專(zhuān)著如《本草綱目》、《新修本草》中均有詳細(xì)記載，近代多部藥學(xué)專(zhuān)著和學(xué)術(shù)文獻(xiàn)中也有研究和記述。美洲大蠊，烘干入藥，具有較高的藥用價(jià)值，有200多種重要成分與其相配，作為中藥，其性寒、味咸、且有微毒，能入三經(jīng)、逐瘀破血、接骨續(xù)筋、消腫止痛等功效，主治腰腿痛、跌打損傷、關(guān)節(jié)炎等病癥。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)證明，美洲大蠊對(duì)白血病有治療作用，并且能抑制腫瘤的擴(kuò)散，對(duì)某些癌癥具有一定的治療作用有散瘀解毒、抗菌消腫、保肝利水、增強(qiáng)免疫及抗腫瘤等功效。

美洲大蠊主要活性成分包括多肽、揮發(fā)油、氨基酸、多糖類(lèi)、脂肪、有機(jī)酸及生物堿，機(jī)體內(nèi)含有鐵、鋅、錳、銅等8種人體必需微量元素，還含有17種氨基酸，纈氨酸、亮氨酸等必須氨基酸以及20多種非必須氨基酸等。美洲大蠊多肽作為一類(lèi)具有抗菌活性的堿性多肽物質(zhì)，是由大蠊腦神經(jīng)分泌細(xì)胞分泌的，對(duì)生長(zhǎng)、變態(tài)、生殖、動(dòng)態(tài)平衡等生理過(guò)程起調(diào)節(jié)作用的多肽類(lèi)物質(zhì)，這類(lèi)活性多肽具有廣譜抗菌、穩(wěn)定性好、分子量較小，抗炎，抗氧化，增強(qiáng)免疫力及促進(jìn)傷口愈合等藥理作用，并且能夠在不傷害正常細(xì)胞、組織的前提下選擇性殺傷腫瘤細(xì)胞，不產(chǎn)生毒副反應(yīng)，是美洲大蠊中最有效的成分之一。

目前對(duì)美洲大蠊多肽的開(kāi)發(fā)還處于初級(jí)階段，采用傳統(tǒng)方法制備得到的美洲大蠊多肽純度低，雜質(zhì)多，色澤深，并存在一定程度的腥臭味，這限制了美洲大蠊多肽的進(jìn)一步應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的主要目的在于提供一種美洲大蠊多肽的制備方法，旨在解決現(xiàn)有方法得到的美洲大蠊多肽純度低的技術(shù)問(wèn)題。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供了一種美洲大蠊多肽的制備方法，包括如下步驟：

提供美洲大蠊，將所述美洲大蠊進(jìn)行脫脂處理，然后采用40％-90％乙醇水溶液作為提取液進(jìn)行成分提取，收集提取液，濃縮至密度為1.10-1.15g/mL，獲得總提取物；

提供水，將所述總提取物與所述水混合，進(jìn)行水沉，隨后過(guò)濾，并收集濾液；將所述濾液上大孔樹(shù)脂柱進(jìn)行梯度洗脫，所述梯度洗脫采用的流動(dòng)相包括：水、70％-80％醇水溶液和至少一個(gè)質(zhì)量百分比濃度低于70％的醇水溶液，然后收集所述70％-80％醇水溶液的洗脫液，并濃縮至所述洗脫液體積的0.1以下，獲得濃縮液；

將所述濃縮液與有機(jī)溶劑混合，進(jìn)行萃取，收集有機(jī)溶劑萃取液，并濃縮所述有機(jī)溶劑至晶體析出，然后靜置于10℃以下的環(huán)境中自然析晶，過(guò)濾，收集晶體，干燥，即得；

其中，所述有機(jī)溶劑為乙酸乙酯和石油醚的混合溶劑，且所述乙酸乙酯和所述石油醚的混合體積比為(2-5):1。

在本發(fā)明美洲大蠊的制備方法中，將所述美洲大蠊進(jìn)行脫脂處理，并采用40％-90％乙醇水溶液作為提取液對(duì)經(jīng)過(guò)脫脂處理的美洲大蠊進(jìn)行成分提取，然后采用大孔樹(shù)脂富集活性成分，并采用乙酸乙酯和石油醚的混合溶劑作為萃取溶劑，之后于10℃以下的環(huán)境中自然析晶，進(jìn)而制備獲得了純度高且顏色純白的美洲大蠊多肽。本發(fā)明方法操作簡(jiǎn)單，工藝優(yōu)化，可獲得高純度的美洲大蠊多肽，適合工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)。

附圖說(shuō)明