[發(fā)明專利]疫霉菌P.hydropathica的LAMP檢測引物、檢測試劑盒及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910236404.3
• 申請日: 2019-03-26
• 公開（公告）號: CN109897911B
• 公開（公告）日: 2022-01-28
• 發(fā)明（設計）人: 張晨;熊琴;錢雨琳;鄭新月;李雪
• 申請（專利權）人: 南京林業(yè)大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 南京申云知識產權代理事務所(普通合伙) 32274
• 代理人: 邱興天

1.一種疫霉菌P.hydropathica的LAMP檢測引物，其特征在于：由正向內引物FIP、反向內引物BIP、正向外引物F3、反向外引物B3和反向環(huán)引物LB組成，各引物序列具體如下：

FIP：5′-TGCTTCACGCCGAGCGTGAACTCCAAGGAGGGCCAGAC-3′；

BIP：5′-TGGACGACTCCTCGGTCATGTCCTTCTTCAGGTACGTGGTC-3′；

F3：5′-GGGCGAGTTCGAGGCT-3′；

B3：5′-CTTGGCCGGCTTGTAGC-3′；

LB：5′-TCGTTACGACGAGATCAAGAACGAG-3′。

2.權利要求1所述的LAMP檢測引物在檢測疫霉菌P.hydropathica中的應用。

3.一種疫霉菌P.hydropathica的LAMP檢測試劑盒，其特征在于：至少包括1次用量以上的引物溶液和LAMP反應液；其中，引物溶液中的引物為正向內引物FIP、反向內引物BIP、正向外引物F3、反向外引物B3和反向環(huán)引物LB，各引物序列具體如下：

FIP：5′-TGCTTCACGCCGAGCGTGAACTCCAAGGAGGGCCAGAC-3′；

BIP：5′-TGGACGACTCCTCGGTCATGTCCTTCTTCAGGTACGTGGTC-3′；

F3：5′-GGGCGAGTTCGAGGCT-3′；

B3：5′-CTTGGCCGGCTTGTAGC-3′；

LB：5′-TCGTTACGACGAGATCAAGAACGAG-3′。

4.權利要求3所述的疫霉菌P.hydropathica的LAMP檢測試劑盒，其特征在于：所述的LAMP反應液含有10×ThermoPol Buffer、MgSO₄、甜菜堿、dNTPs、Bst聚合酶和顯色劑HNB。

5.權利要求3所述的疫霉菌P.hydropathica的LAMP檢測試劑盒在檢測疫霉菌P.hydropathica中的應用。

6.一種檢測疫霉菌P.hydropathica的方法，其特征在于：提取待檢微生物的DNA，以提取的DNA為模板，利用權利要求1所述的LAMP檢測引物或權利要求3所述的LAMP檢測試劑盒進行LAMP；觀察LAMP反應溶液顏色變化，天藍色表示檢測為陽性，存在疫霉菌P.hydropathica；紫色表示檢測結果為陰性，不存在疫霉菌P.hydropathica。