[發(fā)明專利]一種基于PEDV N蛋白特異性納米抗體的阻斷ELISA的檢測(cè)方法及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910233889.0
• 申請(qǐng)日: 2019-03-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110016078B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-11-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 肖書(shū)奇;馬志倩;王天宇;田陽(yáng)升;李爽
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西北農(nóng)林科技大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K16/10
• 分類號(hào): C07K16/10;C12N15/13;C12N15/70;G01N33/569
• 代理公司: 北京慕達(dá)星云知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 李冉

1.一種豬流行性腹瀉病毒核衣殼蛋白N的特異性納米抗體BioNb2的構(gòu)建方法，其特征在于，具體步驟如下：

(1)Nb2-Avi-Tag基因擴(kuò)增

以pCANTAB-5E-Nb2為模板，pET21b-Nb2-F/pET21b-Nb2-R為引物PCR擴(kuò)增獲得Nb2-Avi-Tag基因；

(2)重組蛋白Nb2-Avi-Tag的原核表達(dá)和純化

將步驟(1)獲得的Nb2-Avi-Tag基因連入原核表達(dá)載體pET21b中，轉(zhuǎn)入表達(dá)菌株BL21(DE3)中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)和純化，獲得純化的重組蛋白Nb2-Avi-Tag；

(3)純化的Nb2-Avi-Tag重組蛋白進(jìn)行生物素標(biāo)記

將步驟(2)獲得的純化的重組蛋白Nb2-Avi-Tag調(diào)整為1mg/ml，利用生物素連接酶對(duì)重組蛋白Nb2-Avi-Tag進(jìn)行生物素標(biāo)記，將標(biāo)記好的納米抗體命名為BioNb2；

所述BioNb2的編碼基因?yàn)镾EQ ID NO.1；

步驟(1)所述引物pET21b-Nb2-F/pET21b-Nb2-R的引物如下：

pET21b-Nb2-F：CGGGATCCGCAGGTCCAACTGCAGGAG；SEQ ID NO.2；

pET21b-Nb2-R：CCCAAGCTTTTCGTGCCATTCGATTTTCTGAGCTTCGAAATATCGTTCAGACCTGAGGAGACGGTGACCTGGGTCC；SEQ ID NO.3；

其中下劃線分別標(biāo)記BamH I和Hind III限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)；下游引物中斜體標(biāo)記Avi-Tag序列。