[發(fā)明專利]一種延緩體外培養(yǎng)卵子老化的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910226056.1
• 申請日: 2019-03-25
• 公開（公告）號: CN109897820B
• 公開（公告）日: 2022-03-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 梁成光;溫鑫;韓哲;程建響;趙庭;何東東;楊旻昊
• 申請（專利權(quán)）人: 內(nèi)蒙古大學
• 主分類號: C12N5/075
• 分類號: C12N5/075;C12N5/073
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;陳征

本發(fā)明提供一種延緩體外培養(yǎng)卵子老化的方法，屬于動物繁殖技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)將卵子置于培養(yǎng)液中體外培養(yǎng)過程中添加蝦青素(Astaxanthin)可以有效的改善老化卵子的早期胚胎發(fā)育、增加老化卵子膜電位、降低老化卵子凋亡率。本發(fā)明所提供的在體外培養(yǎng)卵子的過程中添加蝦青素的方法顯著延緩了體外培養(yǎng)卵子老化的速度，提高了老化卵子早期胚胎發(fā)育率，比常規(guī)培養(yǎng)液培養(yǎng)下老化卵子的發(fā)育率提高了15％，能夠為體外受精?胚胎移植(IVF?ET)技術(shù)提供高質(zhì)量的卵子和早期胚胎。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種延緩體外培養(yǎng)卵子老化的方法，屬于動物繁殖技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

哺乳動物的繁殖能力受多種因素的影響，動物個體本身的衰老和生殖細胞的老化嚴重影響動物的繁殖效率，而其中卵子的老化嚴重降低了雌性動物的繁殖能力。卵子的老化與很多因素有關(guān)，年齡、卵丘細胞、活性氧的增加、線粒體功能障礙等都可以導致卵子的老化。其中氧化應(yīng)激導致活性氧的增加是一個很重要的因素。當卵子發(fā)生老化后，此時細胞內(nèi)的氧化及抗氧化平衡便趨向于氧化狀態(tài)，從而激發(fā)蛋白質(zhì)及脂質(zhì)等主要成分。同樣當細胞內(nèi)因為各種原因誘發(fā)氧化應(yīng)激狀態(tài)時又會加速細胞的老化。

卵子老化會帶來諸多臨床不良影響，包括體內(nèi)受精率降低、胚胎質(zhì)量低下、早期妊娠流產(chǎn)可能性增加和后代發(fā)育異常。采用輔助繁殖技術(shù)的卵子在受精前不可避免的需要在體外培養(yǎng)較長一段時間，這就會誘導卵子內(nèi)發(fā)生氧化應(yīng)激，導致卵子老化。在對受精不成功的卵子使用外在ICSI技術(shù)(卵包漿內(nèi)單精注射技術(shù))時，卵子體外培養(yǎng)時間增加的情況就會發(fā)生。因此，若能在體外延緩卵子老化，對于需要延長體外培養(yǎng)卵子時間的輔助生殖技術(shù)是極其有應(yīng)用意義的。

蝦青素(Astaxanthin,AX)是一種提取自微生物、藻類及海洋甲殼類動物的化合物，屬酮式類胡蘿卜素，為葉黃素家族中的一員。蝦青素特殊的理化性質(zhì)賦予了它抗氧化、抗癌、抗疲勞、抗衰老、抗炎以及增強免疫力等功能。目前已有研究表明蝦青素可以延緩腦衰老和皮膚衰老。然而，國際上目前還沒有蝦青素改善卵子老化作用機理的研究。如果蝦青素在卵子老化模型中發(fā)揮作用，這一研究將不僅使人們加深對與卵子老化相關(guān)生殖力下降分子機理的認識，還能對卵子老化所導致的生殖問題及后代發(fā)育提供新的預防與治療措施。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是提供一種延緩體外培養(yǎng)卵子老化的方法。

本發(fā)明首先提高一種體外培養(yǎng)卵子的培養(yǎng)液，該培養(yǎng)液為本領(lǐng)域公知的用于體外培養(yǎng)卵子的培養(yǎng)液作為母液，在該培養(yǎng)液母液中加入蝦青素得到本發(fā)明提供的上述培養(yǎng)液。

優(yōu)選地，蝦青素在上述培養(yǎng)液中的終濃度為1.0-3.0μg/mL；

更優(yōu)選地，蝦青素在培養(yǎng)液中的終濃度為2.0μg/mL。

所述培養(yǎng)液母液為CZB培養(yǎng)液、CZB、KSOM、HTF、M16、M2、TYH、M199、蔗糖溶液、MEMalpha。

進一步地，本發(fā)明提供一種延緩體外培養(yǎng)卵子老化的方法，采用上述含蝦青素的培養(yǎng)液于體外培養(yǎng)卵子。

優(yōu)選地，體外培養(yǎng)卵子的條件為：培養(yǎng)液pH值7.2-7.4、二氧化碳濃度2％-5％、濕度70％-100％、溫度30-39℃的條件下體外培養(yǎng)6-24h。

更優(yōu)選地，體外培養(yǎng)卵子的條件為：二氧化碳濃度5％、濕度100％、溫度37℃的條件下體外培養(yǎng)12h。

本發(fā)明上述方法適用的卵子為哺乳動物MII期卵子卵丘-卵母細胞復合體(COCs)。所述哺乳動物為牛、羊、豬、鼠。

本發(fā)明提供了蝦青素或上述含蝦青素的培養(yǎng)液在延緩體外培養(yǎng)卵子的老化、或提高體外培養(yǎng)后卵子的受精率中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供了蝦青素或上述含蝦青素的培養(yǎng)液在改善老化卵子的早期胚胎發(fā)育中的應(yīng)用，所述早期胚胎為受精卵期至囊胚期階段的早期胚胎。