[發(fā)明專利]一種批量制備人工誘導雌核發(fā)育石斑魚的方法

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• 申請日: 2019-03-19
• 公開（公告）號: CN109717107A
• 公開（公告）日: 2019-05-07
• 發(fā)明（設計）人: 駱劍;梁業(yè)松;樊佳偉;張維煒;何靖;吳延昌;鄧成
• 申請（專利權）人: 海南大學
• 主分類號: A01K61/10
• 分類號: A01K61/10
• 代理公司: 海口翔翔專利事務有限公司 46001
• 代理人: 張耀婷

本發(fā)明公開了一種批量制備人工誘導雌核發(fā)育石斑魚的方法，將批量紫外照射處理的鞍帶石斑魚稀釋精液作為刺激源，與棕點石斑魚卵子進行授精；激活后7分鐘轉(zhuǎn)入預先裝有(4℃±0.5℃)海水的冷休克處理箱中，低溫休克處理10分鐘，使用多個冷休克處理箱可實現(xiàn)更大量的卵子休克處理；進行復溫至常溫處理，然后經(jīng)孵化桶孵化；制備過程中使用對照組倍性分析數(shù)據(jù)對獲得的胚胎進行檢測，實現(xiàn)質(zhì)量控制。通過本發(fā)明的方法，能夠?qū)崿F(xiàn)批量高效制備雌核發(fā)育石斑魚純系群體，為培育優(yōu)良石斑魚品種奠定基礎。

技術領域

本發(fā)明屬于魚類遺傳育種領域，涉及一種海水魚類的培養(yǎng)方法及應用，具體涉及批量制備人工誘導雌核發(fā)育石斑魚的方法。

背景技術

石斑魚(Epinephalus)是世界性名貴暖水性礁棲魚類，同時也是海水養(yǎng)殖中的重要名貴物種。其營養(yǎng)豐富，肉質(zhì)鮮美，具有較高的食用和觀賞價值，是我國華南沿海地區(qū)重要的海水養(yǎng)殖種類。擁有巨大的市場潛力，深受廣大消費者青睞。

石斑魚養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)雖得到很大發(fā)展，但也面臨著品系選育周期長、育苗成活率低、病害嚴重、個體大小參差不齊、優(yōu)良品種的缺乏等亟待解決的問題。選育出優(yōu)良純系或品系是石斑魚良種培育的必由之路。作為一種先雌后雄的性反轉(zhuǎn)大型魚類，石斑魚性成熟時間長，個體發(fā)育為成熟雌性的時間長達3～5年，家系育種等手段耗時非常長，而1代雌核發(fā)育產(chǎn)生相當于7～8代自交選育的純合效果，能夠大大縮短品系選育的周期，因此采用雌核發(fā)育技術手段將顯著提高石斑魚良種培育效率。

盡管人工誘導雌核發(fā)育在其他魚類育種上得到了很好的應用，但由于石斑魚育苗成活率低，由受精卵培育為幼苗的成活率通常小于5％，幼苗培育成成魚的成活率約為30％，常規(guī)的人工雌核發(fā)育技術得到的數(shù)千數(shù)萬的魚卵數(shù)量無法滿足石斑魚育苗和育種的要求。因此批量制備人工誘導雌核發(fā)育的方法能夠快速高效地得到批量雌核發(fā)育魚卵，達到百萬數(shù)量級，解決了育苗的魚卵數(shù)量問題，使得石斑魚雌核發(fā)育育種成為可能，對推動石斑魚優(yōu)良品種的選育具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供了一種批量制備人工誘導雌核發(fā)育石斑魚的方法，該方法實現(xiàn)批量高效制備雌核發(fā)育石斑魚純系群體，為培育優(yōu)良石斑魚品種奠定基礎。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術方案為：提供一種批量制備人工誘導雌核發(fā)育石斑魚的方法，包括如下步驟：

(1)石斑魚精子遺傳物質(zhì)批量滅活處理

a、雄魚的選擇和精子的采集：選擇體格健壯、體重為60～80kg/尾的鞍帶石斑魚雄性成魚為親本，置于海上網(wǎng)箱或陸地池塘進行培育，投喂冰鮮雜魚和魷魚進行培育；待海水平均溫度穩(wěn)定在28～32℃時，采用麻醉劑將其麻醉后撈出水面置于帆布擔架內(nèi)擠精；得到鞍帶石斑魚鮮精后，使用精子稀釋液按照1:8～10比例稀釋，0～4℃冷藏保存；

b、精子遺傳物質(zhì)批量滅活：將8個培養(yǎng)皿同時鋪上稀釋過的鞍帶石斑魚精液，精子液面厚度控制在0.25～0.35mm，置于紫外燈箱中照射；每個紫外燈箱一次可照射滅活16ml稀釋精液，每次照射時間為4分鐘，1小時一個紫外燈箱可滅活大約240ml稀釋精液；多次處理可實現(xiàn)大批量滅活精子遺傳物質(zhì)；照射過程中遮蔽自然光并置于搖床中進行，保持60～80rpm搖動速度以確保精子照射均勻，紫外光照射劑量為40～60mJ/cm²，照射后快速將照射液轉(zhuǎn)入收集管進行收集，于0～4℃冷藏避光保存，以備用；

c、人工授精的方法：鞍帶石斑魚精子紫外照射處理完成后，收集精子置于冰上避光保存；將待產(chǎn)棕點石斑魚雌魚撈出，擦干體表水分，將成熟卵子擠入干燥刻度燒杯中；按照1ml處理精子授精10ml卵子的比例進行精卵人工混合，混合后加入潔凈自然海水攪拌30秒，完成人工授精；

(2)批量冷休克誘導石斑魚卵子