[發明專利]一種短小芽孢桿菌及其用途

在審

• 申請號: 201910201025.0
• 申請日: 2019-03-15
• 公開（公告）號: CN109722399A
• 公開（公告）日: 2019-05-07
• 發明（設計）人: 吳擁軍;李霓藝
• 申請（專利權）人: 貴州大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C05F11/00;C05F11/08;C05F17/00;C12R1/07
• 代理公司: 貴陽東圣專利商標事務有限公司 52002
• 代理人: 袁慶云

本發明公開了一種短小芽孢桿菌及其用途，其形態特征：在LB培養基上培養，菌落形狀近圓形，菌落形態近圓形，邊緣不平滑，淺黃色，表面有褶皺，不透明。鏡檢菌株為桿狀。革蘭氏染色呈陽性。本發明能降解廢棄秸稈。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體來說涉及一種短小芽孢桿菌，同時涉及該短小芽孢桿菌在降解廢棄秸稈中的用途。

背景技術

我國是一個農業大國，每年約產農作物秸稈7億噸，如何處理農作物秸稈是我國農業生產中所面臨的一大難題。農作物秸稈如稻草、麥稈和甘蔗渣等富含纖維素作物是一種重要的可再生資源，除小部分用于堆肥和作為畜禽飼料外,大部分被隨意燒毀,這不僅浪費了寶貴的資源，而且污染了環境。合理利用這種資源是農業可持續發展的一項重要任務。

大量的研究表明,高溫堆肥是目前有機廢棄物無害化處理和資源化利用最安全有效的途徑之一，因此通過利用微生物降解秸稈處理將其制成有機肥，是一項既能利用廢棄資源又能保護環境的技術。在高溫堆肥過程中,加快升溫速度、縮短堆肥腐熟時間是商品有機肥產生經濟效益的關鍵。秸稈中含有大量較難被生物降解的木質纖維素,因此木質纖維素的降解是限制秸稈堆肥腐熟的主要因素。通過接種秸稈降解菌劑，可加快底物中木質纖維類物質的分解。若能篩選到相應的高效功能菌株,將其用于廢棄秸稈的降解和肥料生產,將會有很好的應用前景。

發明內容

本發明的目的在于提供一株降解廢棄秸稈的短小芽孢桿菌。

本發明的另一目的在于提供該短小芽孢桿菌在降解廢棄秸稈中的用途。

本發明的一種短小芽孢桿菌，其形態特征：在LB培養基上培養，菌落形狀近圓形，菌落形態近圓形，邊緣不平滑，淺黃色，表面有褶皺，不透明。鏡檢菌株為桿狀。革蘭氏染色呈陽性。

該菌種已于2018年10月31日保藏到中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所），保藏號：CGMCCNO.16665，名稱：短小芽孢桿菌（Bacillus pumilus）C4。

本發明的一種短小芽孢桿菌（Bacillus pumilus）C4的分離，包括以下步驟：

（一）對短小芽孢桿菌的分離：

稱取商品菌劑HM菌劑10g，置于盛有90mL無菌生理鹽水且含玻璃珠的三角瓶中，37℃，180r/min震蕩60min。取上清作為10-1，依次稀釋至10-2，10-3，10-4，10-5。吸取100μL稀釋好的菌液涂布初篩培養基平板。將涂布好的平板置于28℃恒溫培養箱中培養2d。用接種環挑取分離出的單菌落在LB培養基平板上劃線純化，并置于28℃下培養至長出單菌落。挑取單菌落在LB培養基斜面上劃線，28℃下培養，4℃保存。將保種菌株平板劃線活化后，挑取單菌落在產酶篩選培養基平板上點種，分離溫度下培養3-5d。培養結束后在平板上滴加1-2mL1mg/mol的剛果紅染液染色30min（盡量避免滴加到菌落上），用1mol/L的NaCl溶液脫色30min后，測量菌落直徑（d）與水解圈直徑（D），并計算D/d的比值，以此判斷待測菌株對淀粉的分解能力。選出D/d比值較高的菌株，重新編號。

（二）培養基：

初篩培養基：牛肉膏0.3；蛋白胨1.0；NaCl 0.5；瓊脂粉2.0；pH7.2

產纖維素酶篩選培養基（%）：MgSO4?7H2O 0.01；羧甲基纖維素鈉1.5；CaCl20.01；KH2PO4 0.05；(NH4)2SO4 0.2；K2HPO4?3H2O 0.2；自然pH