[發明專利]一種用于絲狀真菌形態特征顯微觀察的制片裝置及方法

在審

• 申請號: 201910181431.5
• 申請日: 2019-03-11
• 公開（公告）號: CN109839380A
• 公開（公告）日: 2019-06-04
• 發明（設計）人: 馬建;徐昭煥;崔汝強;石緒根;況衛剛
• 申請（專利權）人: 江西農業大學
• 主分類號: G01N21/84
• 分類號: G01N21/84;G01N1/28
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司 11385
• 代理人: 董芙蓉

本發明屬于菌物學研究領域，公開了一種用于絲狀真菌形態特征顯微觀察的制片裝置及方法，用于絲狀真菌形態特征顯微觀察的制片裝置包括玻璃培養皿，所述玻璃培養皿內部放置有圓形濾紙，圓形濾紙表面放置有單凹載玻片，所述單凹載玻片中部設置有凹槽，凹槽上部放置有無菌蓋玻片。該發明結構簡單，設計科學，操作簡便，省時省力，可直接用于顯微觀察絲狀真菌自然生長狀態下菌體的形態特征，避免傳統制片過程中引起的菌絲重疊、孢子脫落、氣泡產生及對菌體自然生長狀態的破壞，便于明確真菌的產孢方式、產孢結構和孢子形成的動態發育過程，保證絲狀真菌物種鑒定的準確性與可靠性。

技術領域

本發明屬于菌物學研究領域，尤其涉及一種用于絲狀真菌形態特征顯微觀察的制片裝置及方法。

背景技術

長期以來，對絲狀真菌的分類研究主要依據菌體形態特征進行描述鑒定，菌體產孢方式、產孢結構及孢子形態特征是屬、種界定的主要標準，因此獲取真實反映真菌典型形態特征的生物玻片顯得十分重要。

目前，業內常用的絲狀真菌形態特征顯微觀察制片方法主要為菌絲挑取制片法：首先在載玻片中央滴一滴浮載劑，然后用細挑針從培養基上挑取少量適宜培養的絲狀真菌培養物置于浮載劑中，并直接用細挑針將其分散開，最后蓋上蓋玻片用于顯微觀察。

但此方法存在以下幾個不足之處：

(1)制片頻繁，每觀察一次需制片一次，且難以獲得觀察效果好的生物玻片，需大量制片，耗時耗力；

(2)菌絲挑取易引起菌絲交錯重疊，致使難以制備最佳的生物玻片，影響真菌典型形態特征的顯微觀察；

(3)菌絲挑取置于浮載劑及加蓋蓋玻片過程中極易誘使浮載劑產生氣泡，影響真菌形態特征顯微觀察效果；

(4)菌絲挑取及加蓋蓋玻片等極易破壞菌絲自然生長狀態，引起真菌孢子脫落，致使制備的生物玻片難以真實反映真菌的產孢方式及孢子形成的動態發育過程，影響絲狀真菌物種鑒定的準確性與可靠性。

綜上所述，現有制片方法極易破壞菌體的自然生長狀態，引起菌絲重疊、孢子脫落及氣泡產生等系列問題，干擾絲狀真菌形態特征的顯微觀察，影響絲狀真菌的形態鑒定。

發明內容

本發明的目的是提供一種用于絲狀真菌形態特征顯微觀察的制片方法，即針對現有菌絲挑取制片法存在的嚴重缺陷而建立的一種新的制片方法。本方法無需重復制片，結構簡單，設計科學，操作簡便，便于全面、精確地觀察絲狀真菌自然生長狀態下的產孢方式、產孢結構和孢子形成的動態發育過程，獲得典型的形態特征，保證絲狀真菌物種鑒定的準確性與可靠性，彌補現有技術的不足。

本發明是這樣實現的，一種用于絲狀真菌形態特征顯微觀察的制片裝置，包括玻璃培養皿，所述玻璃培養皿內部放置有圓形濾紙，圓形濾紙表面放置有單凹載玻片，所述單凹載玻片中部設置有凹槽，凹槽上部放置無菌蓋玻片。

進一步，所述圓形濾紙的直徑為8cm；所述玻璃培養皿的直徑為9cm；所述單凹載玻片的尺寸為2.5cm×7.5cm，厚度為3mm；所述凹槽的直徑為16mm，深度為2.2mm；所述無菌蓋玻片的尺寸為18mm×18mm，厚度為0.13mm–0.17mm。

本發明的另一目的在于提供一種所述用于絲狀真菌形態特征顯微觀察的制片裝置的制片方法，所述用于絲狀真菌形態特征顯微觀察的制片方法包括以下步驟：

步驟一、首先將圓形濾紙置于玻璃培養皿中，再將單凹載玻片置于圓形濾紙表面，蓋上培養皿蓋，高壓蒸汽滅菌，于無菌操作臺中，用滅菌接種針挑取少量經適宜培養、待觀察描述的絲狀真菌菌絲連同少量培養基置于單凹載玻片凹槽中央；

步驟二、凹槽上部加蓋無菌蓋玻片，圓形濾紙表面添加適量無菌水，蓋上培養皿蓋后用封口膜密封，放置于25℃、12h光暗交替培養，以利于真菌生長發育并產生足量分生孢子；