[發明專利]一種彈性蛋白肽的提取方法

在審

• 申請號: 201910173879.2
• 申請日: 2019-03-08
• 公開（公告）號: CN109680031A
• 公開（公告）日: 2019-04-26
• 發明（設計）人: 陳國榮;黃軻
• 申請（專利權）人: 福建康是美生物科技有限公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K14/46;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;A61K8/64;A61Q19/08;A61K38/39;A61P39/06
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

本發明公開了一種彈性蛋白肽的提取方法，屬于生物活性物質提取技術領域。該方法為：魚軟骨剔除魚肉等雜質，洗凈絞碎后，乙醇溶液浸泡；加入Tris?HCl緩沖液，超聲波處理；加入彈性蛋白酶，恒溫水浴振蕩培養；滅酶后將酶解液抽濾，棄濾渣，收集濾液；濾液進行第一次超濾，收集透過液；透過液，進行第二次超濾，收集超濾液；所得超濾液，透析除鹽，旋轉蒸發，冷凍干燥后的彈性蛋白多肽。本發明的提取方法簡單快速，提取效率高，成本低。制備的彈性蛋白多肽，還原力強，能有效清除自由基，抗氧化效果佳，能夠顯著提高皮膚中膠原蛋白肽的含量。在食品、化妝品、醫藥行業具有廣泛的應用價值。

技術領域

本發明屬于生物活性物質提取技術領域，具體涉及一種彈性蛋白肽的提取方法。

背景技術

彈性蛋白是彈性纖維的主要組成之一，彈性纖維是由均質狀的彈性蛋白和外面包繞微原纖維殼組成。微原纖維是由一些糖蛋白構成的，為所必需的保持彈性纖維的完整性的成分。在機體發育的彈性組織內，糖蛋白微原纖維，是彈性蛋白附著的骨架，常先于彈性蛋白出現,對于彈性蛋白分子組裝成彈性纖維具有重要的作用。彈性蛋白為一種高度交叉的水不溶性水解蛋白，分子量為70KDa。彈性蛋白分子中非極性氨基酸（疏水性氨基酸）占95%，甘氨酸含量占總量的 1/3，脯氨酸占 10%，羥脯氨酸占 1%，其具有抗酸、堿水解作用。彈性蛋白除斷裂肽鍵劑外，不溶于任何溶劑，是一種在有水情況下具有橡膠延展性和低彈性模量的聚合物質。雖然彈性蛋白分布沒有膠原蛋白廣泛，但也大量存在于肺、大動脈、某些韌帶、皮膚及耳廓等富含彈性的組織內。

在光老化過程中，基質金屬蛋白酶表達上調從而引發彈性蛋白降解，致使皮膚組織出現日光性彈力纖維變性，致使皮膚老化。通過向化妝品中添加彈性蛋白水解產物用于延緩皮膚衰老、對抗光老化、促進皮膚細胞增殖和誘導皮膚年輕化。另外，彈性蛋白作為一種細胞外基質蛋白，在體內可與微原纖維結合形成彈性纖維，其主要功能是被動伸縮，賦予經常受力而形變的組織器官以伸縮性和可逆的形變能力。近年研究發現，單性蛋白的變化與多種疾病有關，如動脈瘤、動脈粥樣硬化和面型阻塞性肺疾病等。

隨著市場對彈性蛋白肽需求的與日俱增，現有彈性蛋白肽的制備工藝，因制備工藝繁瑣、成本高、效率低等問題，以遠不能滿足需要。因此，需要一種更高效的彈性蛋白肽制備工藝。

發明內容

本發明的目的在于針對現有彈性蛋白肽提取方法的不足，提供一種彈性蛋白肽的提取方法。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種彈性蛋白肽的提取方法，包括以下具體步驟：

（1）魚軟骨剔除魚肉等雜質，洗凈絞碎后，加入2-3倍體積的95%乙醇溶液浸泡6小時，去乙醇，重復用95%乙醇溶液重復浸泡一次，去乙醇，蒸餾水洗滌2次。

（2）經洗滌后的魚軟骨中加入Tris-HCl緩沖液，然后進行超聲波處理；

（3）經超聲波處理后的軟骨溶液中，加入彈性蛋白酶，恒溫水浴振蕩培養；

（4）滅酶，將酶解液抽濾，棄濾渣，收集濾液；

（5）步驟（4）所得濾液在超濾條件下，用超濾膜進行第一次超濾，收集透過液；

（6）步驟（5）收集所得的透過液，加入1倍體積的pH 9.0的Tris-HCl緩沖液，混勻后，在超濾條件下，進行第二次超濾，收集超濾液；

（7）步驟（6）所得超濾液，透析除鹽，旋轉蒸發，冷凍干燥后的彈性蛋白多肽。

步驟（2）中，Tris-HCl的pH為9.0，加入量為每100g魚軟骨中加入250-300mL Tris-HCl緩沖液；超聲處理的超聲頻率為60KHz，功率為150W，超聲處理時間為30min。