[發明專利]一種制備含量子點標記的抗犬病毒抗體免疫層析試紙條的方法、制備的試紙條及應用

有效

• 申請號: 201910173048.5
• 申請日: 2019-03-07
• 公開（公告）號: CN111665363B
• 公開（公告）日: 2023-10-17
• 發明（設計）人: 田克恭;王瑩;趙坤坤;張許科
• 申請（專利權）人: 北京中科基因技術有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/558;G01N33/533;G01N33/569
• 代理公司: 北京華夏正合知識產權代理事務所(普通合伙) 11017
• 代理人: 韓登營

1.一種制備含量子點標記的抗犬病毒抗體免疫層析試紙條的方法，其中，所述方法包括：

步驟(1)用最大吸收峰為500～700nm的量子點標記所述抗犬病毒抗體，所述量子點與所述抗犬病毒抗體摩爾比為1:1～1:150，得到所述所述量子點標記的抗犬病毒抗體；

步驟(2)將所述步驟(1)中的所述量子點標記的抗犬病毒抗體進行封閉，所述量子點標記抗體封閉液包含pH7.4的0.1M PBS、0.2％～0.8％W/V BSA，得到封閉的量子點標記的抗犬病毒抗體；

步驟(3)將所述步驟(2)中的所述封閉的量子點標記的抗犬病毒抗體進行復溶，所述量子點標記抗體復溶液包含pH7.4的0.1M PBS、0.4％～2.0％W/V海藻糖、0.02％V/V Tween-20、0.02％V/V Proclin300，得到復溶的量子點標記的抗犬病毒抗體；

步驟(4)將所述步驟(3)中的所述復溶量子點標記的抗犬病毒抗體吸附于量子點標記墊上，所述吸附的量子點標記的抗犬病毒抗體濃度為5～150μg/ml；以及

步驟(5)將固定抗體用固定抗體稀釋液稀釋，所述固定抗體稀釋液包含pH7.4的0.1MPBS、0.5％W/V蔗糖、0.1％～1.0％W/VPEG 6000，所述固定抗體稀釋至0.2～1.0mg/ml，然后固定于檢測線上，質控線上固定羊抗鼠二抗或羊抗鼠多抗。

2.根據權利要求1所述的方法，其中，所述步驟(1)中所述抗犬病毒抗體為犬細小病毒單克隆抗體、犬瘟熱病毒單克隆抗體、犬腺病毒單克隆抗體、犬腺病毒1型單克隆抗體、犬腺病毒2型單克隆抗體、或犬副流感病毒單克隆抗體，所述量子點最大吸收峰為520～660nm，所述量子點與所述抗犬病毒抗體摩爾比為1:5～1:100；優選地，所述量子點最大吸收峰為520～625nm，所述量子點與所述抗犬病毒抗體摩爾比為1:5～1:20；最優選地，所述量子點最大吸收峰為520～565nm。

3.根據權利要求1所述的方法，其中，所述步驟(1)中所述抗犬病毒抗體為犬細小病毒單克隆抗體CPV-10B11，所述犬細小病毒單克隆抗體CPV-10B11由保藏號為CCTCC No:C201578的小鼠骨髓雜交瘤細胞10B11株分泌；或為犬瘟熱病毒單克隆抗體CDV-1G5，所述犬瘟熱病毒單克隆抗體CDV-1G5由保藏號為CCTCC No：C2015201的小鼠骨髓雜交瘤細胞1G5分泌；或為犬腺病毒單克隆抗體CAV-5G4，所述犬腺病毒單克隆抗體CAV-5G4重鏈可變區核苷酸序列如SEQ.ID No.1或其簡并序列所示、輕鏈可變區核苷酸序列如SEQ.ID No.2或其簡并序列所示；或為犬腺病毒1型單克隆抗體CAV1-2F9，所述犬腺病毒1型單克隆抗體CAV1-2F9其重鏈可變區核苷酸序列如SEQ.ID No.5或其簡并序列所示、輕鏈可變區核苷酸序列如SEQ.ID No.6或其簡并序列所示；或為犬腺病毒2型單克隆抗體CAV2-4H12，所述犬腺病毒2型單克隆抗體CAV2-4H12重鏈可變區核苷酸序列如SEQ.ID No.9或其簡并序列所示、輕鏈可變區核苷酸序列如SEQ.ID No.10或其簡并序列所示；或為犬副流感病毒單克隆抗體CPIV-4H1，所述犬副流感病毒單克隆抗體CPIV-4H1重鏈可變區核苷酸序列如SEQ.ID No.13或其簡并序列所示、輕鏈可變區核苷酸序列如SEQ.ID No.14或其簡并序列所示。

4.根據權利要求1所述的方法，其中，所述步驟(2)中所述量子點標記抗體封閉液包含pH7.4的0.1M PBS、0.2％～0.8％W/V BSA，0.02％W/V海藻糖。

5.根據權利要求1所述的方法，其中，所述步驟(4)中所述吸附的量子點標記的抗犬病毒抗體濃度為10～100μg/ml；所述量子點標記墊為玻璃纖維膜或聚酯膜。

6.根據權利要求1所述的方法，其中，所述步驟(5)中所述固定抗體為犬細小病毒抗體、犬瘟熱病毒抗體、犬腺病毒1型抗體、犬腺病毒2型抗體、或犬副流感病毒抗體；所述羊抗鼠二抗或羊抗鼠多抗濃度為0.4～2.5mg/ml。