[發明專利]一種基于微滴數字PCR定量檢測馬鈴薯成分的試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 201910171570.X
• 申請日: 2019-03-07
• 公開（公告）號: CN109680098A
• 公開（公告）日: 2019-04-26
• 發明（設計）人: 李志勇;劉二龍;呂英姿;劉婧文;關麗軍;董旭婉
• 申請（專利權）人: 廣東出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6851
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 呂紀濤

本發明提供了一種基于微滴數字PCR定量檢測馬鈴薯成分的試劑盒及其應用，屬于分子生物學檢測領域。基于微滴數字PCR定量檢測馬鈴薯成分的試劑盒，包括ST?LS1基因的上游引物、ST?LS1基因的下游引物和ST?LS1基因的探針。所述試劑盒在定量檢測樣品中馬鈴薯成分的應用。馬鈴薯成分定量檢測的微滴數字PCR方法，利用數字PCR系統探測馬鈴薯特異性單拷貝物種基因ST?LS1熒光信號，測得的馬鈴薯特異性單拷貝物種基因ST?LS1拷貝數濃度，根據拷貝數濃度(拷貝數/μL)與馬鈴薯質量(mg)的線性關系計算得到馬鈴薯成分的含量。本發明可對馬鈴薯成分進行特異性定量檢測，具有簡便、快速，檢測靈敏度高的特點。

技術領域

本發明屬于分子生物學檢測領域，具體涉及一種基于微滴數字PCR定量檢測馬鈴薯成分的試劑盒及其應用。

背景技術

馬鈴薯(Solanum tuberosum)富含大量的膳食纖維、維生素、礦物質和必需氨基酸等營養成分，是世界第四大主糧作物，市場上馬鈴薯產品品種越來越豐富。由于不同來源的薯類或谷物類全粉價格差別較大，有的相差高達10倍以上，如馬鈴薯全粉價格較玉米、木薯等價格高，但相較馬蹄淀粉價格又較低，不同來源薯粉類肉眼難以辨識，這為一些不法商家提供投機獲利的機會。為保障馬鈴薯主食產品市場的健康發展，因此建立馬鈴薯成分的精準的定量檢測方法有利于滿足其品質的檢測與監管。

目前，已有關于測定馬鈴薯源成分的報道，包括普通生物顯微鏡法、光譜法、小角X射線散射(SAXS)和實時熒光PCR等技術。雖然上述方法能實現檢測馬鈴薯成分，但是操作步驟繁瑣、耗時，而且不能得到精確定量測定結果，不能滿足行業需要。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種快速、簡便、特異且靈敏地一種基于微滴數字PCR定量檢測馬鈴薯成分的試劑盒及其應用。

本發明提供的一種基于微滴數字PCR定量檢測馬鈴薯成分的試劑盒，包括ST-LS1基因的上游引物、ST-LS1基因的下游引物和ST-LS1基因的探針；

所述ST-LS1基因的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；

所述ST-LS1基因的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；

所述ST-LS1基因的探針的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

優選的，還包括2×PCR預混液。

本發明提供了所述的試劑盒在定量檢測樣品中馬鈴薯成分的應用。

優選的，所述定量檢測馬鈴薯成分的方法，包括以下步驟：

1)提取系列梯度質量的馬鈴薯基因組DNA；

2)以步驟1)中馬鈴薯基因組DNA為擴增模板，基于微滴式數字PCR擴增ST-LS1基因；

3)讀取和分析步驟2)中微滴式數字PCR反應擴增結果，得到ST-LS1基因的拷貝濃度；

4)建立馬鈴薯質量與ST-LS1基因的拷貝濃度的線性關系；

5)采用微滴式數字PCR反應擴增樣品中ST-LS1基因，讀取和分析微滴式數字PCR反應擴增結果，得到樣品的ST-LS1基因的拷貝濃度；

6)將待測樣品的ST-LS1基因的拷貝濃度代入步驟4)中得到的線性關系中換算，得到樣品中馬鈴薯成分的含量。

優選的，步驟2)中所述微滴式數字PCR的反應體系如下：2×PCR預混液10μL、10μmol/μL的上游引物0.5μL、10μmol/μL的下游引物濃度0.5μL、10μmol/μL探針0.5μL，擴增模板2μL，補水至20μL。