[發明專利]一種用于肺纖維化染色的熒光探針

有效

• 申請號: 201910168983.2
• 申請日: 2019-03-06
• 公開（公告）號: CN109991199B
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發明（設計）人: 李新;李佳;胡永洲;臧奕;李曉榮;董瑩
• 申請（專利權）人: 浙江大學;中國科學院上海藥物研究所
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;A61K49/00
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 趙杭麗

本發明提供一種用于肺纖維化染色的熒光探針，是一種肺纖維化組織或細胞染色的小分子熒光探針。本發明提供的熒光探針穩定性好，能夠長期保存使用，且無毒使用安全；檢測信噪比高，靈敏度好；操作簡單快速，結果重現性高。可在細胞、組織，及病理進程評估中的應用，尤其在肺纖維化病理性細胞染色、在肺纖維化組織切片染色及在肺纖維化模型檢測中的應用。探針的結構：

技術領域

本發明屬生物檢測領域，涉及一種用于肺纖維化病理性細胞、組織、病理進程評估染色檢測的熒光探針，尤其涉及一種用于肺纖維化染色的熒光探針及其應用。

技術背景

肺纖維化是由多種誘因引起的肺部炎癥、肺泡持續性損傷、胞外基質反復破壞、修復、重建并過度沉積，最終導致肺組織結構改變、功能喪失的一類間質性疾病。絕大部分肺纖維化患者病因不明，因而被稱為特發性肺纖維化(Idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)。IPF是一種“類腫瘤疾病”，多發于50歲以上老年人，診斷后的平均生存期僅2.8年，死亡率高于大多數腫瘤，嚴重影響人體呼吸功能和正常生活。隨著全球老齡化社會的邁入，其發病率也在逐年增加。美國特發性肺纖維化患者數量在10年間翻了10倍,我國雖然沒有明確的統計數據,但發病率無疑也在呈現上升趨勢。2018年1月，我國首個特發性肺纖維化流行病學研究正式啟動，由此可見肺纖維化在未來勢必會嚴重危害人類的生命健康。

雖然病情嚴重，但IPF卻極度缺乏有效的治療手段。目前FDA批準的用于治療IPF的兩個藥物，吡非尼酮(Pirfenidone)以及尼達尼布(Nintedanib),主要通過減緩用力肺活量(FVC)的降低速率來延緩病情惡化，被用于早中期的肺纖維化的治療，但是目前這兩種藥物依然難以逆轉肺纖維化病程，是否能延長患者壽命也未可知。

改善特發性肺纖維化的預后，最有效的方式便是盡早發現、盡早治療從而抑制病情惡化。如今臨床上該疾病的確診依然非常復雜，檢測手段以CT為主，但是并不能完全確定，還需要綜合病人的臨床表現、病因病史甚至需要通過肺活檢來做出明確判斷。

細胞及動物水平的藥理學研究手段，對推動IPF藥物研發具有重要意義。目前細胞水平的實驗主要通過蛋白免疫印跡技術(Western blot)檢測細胞外基質相關蛋白的表達，如平滑肌肌動蛋白(α-SMA)、粘連蛋白(Fibronectin)、膠原蛋白(Collagen1-α)等來指示肺成纖維細胞是否被激活。動物水平肺纖維化的檢測以組織切片的HE染色和MASSON染色作為金標準，然而染色過程繁瑣，所需試劑較多，耗時較長(1-2天)。發展能在細胞及動物組織中染色區分肺纖維化病理進程的方法，可以提高藥物篩選的效率。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種用于肺纖維化染色的熒光探針，是一種肺纖維化組織或細胞染色的小分子熒光探針，具有式I所示的結構：

本發明的又一個目的是提供式I所示化合物在檢測肺纖維化細胞、組織，及病理進程評估中的應用，尤其在肺纖維化病理性細胞染色、在肺纖維化組織切片染色及在肺纖維化病理進程評估中的應用。

本發明以肺纖維化組織切片中的應用為例，可通過以下步驟實現：(1)將不同組別的老鼠(陰性對照組、模型組、陽性藥組)麻醉后，取出肺組織。(2)用4％多聚甲醛固定24小時后進行石蠟切片。(3)用10μM濃度的式Ⅰ分子探針孵育切片30min后，PBS洗掉后即可用熒光顯微鏡采集圖像。本發明提供的熒光探針的特征在于，它在非纖維化的肺組織切片中僅呈現微弱的熒光，但在纖維化的肺組織切片中呈現出強熒光，從而實現高分辨率的肺纖維化檢測評估。

本發明涉及的熒光探針具有以下有益效果：(1)穩定性好，能夠長期保存使用；(2)使用安全，無毒，不會對操作者帶來健康影響；(3)檢測信噪比高，靈敏度好；(4)染色過程簡單(30分鐘)，實驗結果易重復；(5)可用于細胞、組織及活體小鼠肺纖維化成像，節省實驗小鼠數量，降低個體化差異帶來的實驗誤差。

附圖說明