[發明專利]一種用于純化血紅蛋白的陰離子交換層析柱的清洗方法

有效

• 申請號: 201910167751.5
• 申請日: 2019-03-06
• 公開（公告）號: CN109847406B
• 公開（公告）日: 2021-03-30
• 發明（設計）人: 游可為;石松;閆曉玲;孫新宇;史國營;陳浩源
• 申請（專利權）人: 潤方（北京）生物醫藥研究院有限公司
• 主分類號: B01D15/20
• 分類號: B01D15/20;B01D15/36
• 代理公司: 北京市邦道律師事務所 11437
• 代理人: 薛艷

本發明公開了一種用于純化血紅蛋白的陰離子交換層析柱的清洗方法，包括：a將純化血紅蛋白后的陰離子交換層析柱的進出液口調整；b用去離子水清洗所述層析柱，去掉所述層析柱在使用后殘留的洗脫液，然后用酸性水溶液清洗所述層析柱；c用去離子水清洗所述層析柱洗掉草酸，然后用含有Trion X?100和乙二胺四乙酸的水溶液清洗所述層析柱，該水溶液的PH值為4.3?5.5；d用去離子水清洗所述層析柱，洗掉Trion X?100和乙二胺四乙酸。本發明用于純化血紅蛋白的陰離子交換層析柱的清洗方法，可快速去除純化血紅蛋白后殘留在層析柱中的雜質，節省批間操作時間，延長填料使用壽命，降低成本并保證純化產品質量。

技術領域

本發明屬于藥物領域，特別是涉及一種用于純化血紅蛋白的陰離子交換層析柱的清洗方法。

背景技術

陰離子交換層析法是大量生產目的蛋白的首選方法，在生物制藥領域，被廣泛應用。陰離子交換層析柱在純化血紅蛋白后，填料中會殘留一些深色雜質，會對下次使用造成影響，縮短填料的使用壽命，并導致純化產品質量下降?，F有的清洗方法主要用水或用鹽溶液、酸、堿等溶液浸泡沖洗，但現有的方法無法快速清洗純化血紅蛋白后殘留的深色雜質。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種用于純化血紅蛋白的陰離子交換層析柱的快速清洗方法，該方法可快速去除純化血紅蛋白后層析柱上殘留的雜質，節省批間操作時間，延長填料使用壽命，降低成本并保證純化產品質量。

為解決上述技術問題，本發明提供了一種用于純化血紅蛋白的陰離子交換層析柱的快速清洗方法，其包括如下步驟：

a、將純化血紅蛋白后的陰離子交換層析柱的進出液口調整，使清洗液體通過層析柱的方向與處理血紅蛋白的方向相反；

b、用去離子水清洗所述層析柱，去掉所述層析柱在使用后殘留的洗脫液，然后用酸性水溶液清洗所述層析柱；

c、用去離子水清洗所述層析柱洗掉草酸，然后用含有Trion X-100和乙二胺四乙酸的水溶液清洗所述層析柱，該水溶液的PH值為4.3-5.5；

d、用去離子水清洗所述層析柱，洗掉Trion X-100和乙二胺四乙酸。

上述用于純化血紅蛋白的陰離子交換層析柱的清洗方法，其中，所述步驟b中，所述酸性水溶液為鹽酸或草酸，優選草酸。

上述用于純化血紅蛋白的陰離子交換層析柱的清洗方法，其中，所述步驟b中，所述酸性水溶液的摩爾濃度為0.1-0.3M，優選為0.3M。

上述用于純化血紅蛋白的陰離子交換層析柱的清洗方法，其中，所述步驟c中，所述含有Trion X-100和乙二胺四乙酸的水溶液中，Trion X-100的體積濃度為0.5％-2％，優選為2％，乙二胺四乙酸的摩爾濃度為0.1-0.3M，優選為0.3M。

上述用于純化血紅蛋白的陰離子交換層析柱的清洗方法，其中，所述步驟c中，所述含有Trion X-100和乙二胺四乙酸的水溶液的PH值為4.3。

上述用于純化血紅蛋白的陰離子交換層析柱的清洗方法，其中，所述步驟b、c或d中，所述通過層析柱的液體流速為5-10ml/min。

上述用于純化血紅蛋白的陰離子交換層析柱的清洗方法，其中，所述層析柱內的填料型號為Q Sepharose X L。

本發明的用于純化血紅蛋白的陰離子交換層析柱的清洗方法具有如下有益效果：

1、本發明的清洗方法，針對純化血紅蛋白的離子交換柱清洗效果好，內毒素與總有機碳的殘留非常低，能夠延長填料使用壽命，降低成本并保證純化產品質量；

2、本發明的清洗方法，能耗低，處理快速，可快速去除純化血紅蛋白后殘留在層析柱中的雜質，在短時間內進行下一批的純化，節省批間操作時間，提高生產效率。

具體實施方式