[發(fā)明專利]一種制備高純度多殺菌素的分離純化方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910143165.7
• 申請(qǐng)日: 2019-02-27
• 公開（公告）號(hào): CN109851649A
• 公開（公告）日: 2019-06-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳峰;王奇;劉培;侯爭(zhēng)平;楊愛(ài)華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 內(nèi)蒙古拜克生物有限公司
• 主分類號(hào): C07H17/08
• 分類號(hào): C07H17/08;C07H1/06
• 代理公司: 北京精金石知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11470
• 代理人: 劉俊玲

本發(fā)明提供了一種制備高純度多殺菌素的分離純化方法，涉及抗生素提取技術(shù)領(lǐng)域。該方法操作步驟包括：刺糖多孢菌發(fā)酵液預(yù)處理、浸提、大孔樹脂吸附、納濾濃縮和結(jié)晶。對(duì)分離純化工藝進(jìn)行了優(yōu)化，使用了預(yù)處理劑、浸提溶劑、洗脫劑和結(jié)晶劑，并對(duì)其用量進(jìn)行了優(yōu)化；對(duì)預(yù)處理后離心的沉淀進(jìn)行二次浸提，提高了多殺菌素的純度和收率，純度為97.6％?98.8％，收取率為91.3％?95.8％。另外，優(yōu)化了大孔樹脂吸附的操作過(guò)程，有效減少了有機(jī)溶劑的用量，降低了生產(chǎn)成本，縮短了生產(chǎn)周期，工藝流程更加簡(jiǎn)單易控制。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及抗生素提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種制備高純度多殺菌素的分離純化方法。

背景技術(shù)

多殺菌素(spinosad)是一種新型的綠色廣譜大環(huán)內(nèi)酯類生物殺蟲劑，由土壤放線菌刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa)經(jīng)有氧發(fā)酵后產(chǎn)生的胞內(nèi)次級(jí)代謝產(chǎn)物。在天然多殺菌素分離提取物中，兩個(gè)最高活性組分是spinosyn A和spinosyn D，分別占所有組分的85％-90％和10％-15％。多殺菌素為淺灰白色的固體結(jié)晶，帶有類似于輕微陳腐泥土氣味，易溶于甲醇、乙醇、乙腈、乙酸乙酯、丙酮、乙腈、二甲基酰胺、二氯甲烷等有機(jī)溶劑，在水溶液中的pH值為7.74。多殺菌素能夠有效控制鱗翅目、雙翅目和纓翅目害蟲，同時(shí)對(duì)某些特定種類的害蟲也有一定的毒殺作用，具有殺蟲譜廣、高效、低殘留、作用方式獨(dú)特、環(huán)境友好和對(duì)非靶標(biāo)動(dòng)物無(wú)害等優(yōu)點(diǎn)，在國(guó)外已經(jīng)投入使用多年，具有廣泛的應(yīng)用前景。

目前，國(guó)內(nèi)外常用的從發(fā)酵液中提取多殺菌素的方法主要有溶媒萃取法和吸附色譜法。溶媒萃取法的原理是利用多殺菌素與雜質(zhì)在溶媒中的溶解度不同，將多殺菌素有選擇性地從一種溶劑轉(zhuǎn)移到另一種溶劑中，從而達(dá)到濃縮去雜的目的。其分離速度快，收率高，且產(chǎn)品質(zhì)量有保證，但是此法很難得到高純度產(chǎn)品，需消耗大量的有機(jī)試劑，增加了廢水的處理難度，還會(huì)帶來(lái)嚴(yán)重的污染。吸附法是利用一種適當(dāng)?shù)奈絼蕉鄽⒕兀缓笥糜袡C(jī)溶劑把多殺菌素從吸附劑上洗脫出來(lái)，達(dá)到除雜和去除色素的目的。其中，大孔吸附樹脂是一類不含交換基團(tuán)且具有大孔結(jié)構(gòu)的有機(jī)高聚物吸附劑，采用大孔吸附樹脂法提取多殺菌素，獲得的產(chǎn)品純度較高，操作簡(jiǎn)便安全，樹脂可以再生，反復(fù)利用可以降低生產(chǎn)成本，但是提取過(guò)程中需要進(jìn)行梯度洗脫，消耗大量的有機(jī)溶劑，且耗時(shí)長(zhǎng)。

對(duì)于多殺菌素的提取，中國(guó)專利CN103725734A公開了一種多殺菌素的補(bǔ)料發(fā)酵及分離純化方法，其中分離純化多殺菌素的方法主要包括大孔樹脂動(dòng)態(tài)吸附、丙酮水溶液梯度洗脫、超濾、納濾和乙酸乙酯萃取，得到的產(chǎn)品純度高達(dá)95.43％，收率達(dá)87.0％。但其產(chǎn)品純度和收率較低，在梯度洗脫的過(guò)程中消耗大量的有機(jī)溶劑，導(dǎo)致大量廢水的產(chǎn)生，且耗時(shí)較長(zhǎng)。中國(guó)專利CN107474088A公開了一種用于多殺菌素工業(yè)化大生產(chǎn)的提取工藝，主要步驟包括：發(fā)酵液預(yù)處理、板框過(guò)濾、閃蒸烘干、浸提、轉(zhuǎn)相水洗、反萃取、重結(jié)晶，所得產(chǎn)品收率為87.7％，產(chǎn)品含量為97.5％。雖然溶媒使用量小，但是操作過(guò)程復(fù)雜，收率較低。

目前從發(fā)酵液中提取多殺菌素的工藝仍存在一些問(wèn)題，比如：產(chǎn)品純度和收率較低、溶媒用量大、產(chǎn)生大量的廢液、生產(chǎn)成本高、提取工藝復(fù)雜、耗時(shí)長(zhǎng)等。因此，亟需優(yōu)化多殺菌素分離純化工藝，有效提高多殺菌素的產(chǎn)品質(zhì)量、減少溶媒用量、簡(jiǎn)化工藝流程，縮短生產(chǎn)周期。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種制備高純度多殺菌素的分離純化方法。克服了現(xiàn)有技術(shù)中存在的問(wèn)題，優(yōu)化了分離純化工藝，提高了多殺菌素的純度和收率，有效減少了有機(jī)溶劑用量，縮短了生產(chǎn)周期。

本發(fā)明提供了一種制備高純度多殺菌素的分離純化方法，包括以下步驟：

(1)刺糖多孢菌發(fā)酵液預(yù)處理：用NaOH水溶液調(diào)節(jié)發(fā)酵液pH，加入預(yù)處理劑，攪拌混勻，靜置，離心，分別收集沉淀和上清液A；

所述的預(yù)處理劑包括甲醇、丙酮、二甲基酰胺、月桂醇硫酸鈉和山梨酸鉀；