[發明專利]骨髓間充質干細胞的線粒體在改善卵母細胞藥物中的應用

在審

• 申請號: 201910139497.8
• 申請日: 2019-02-25
• 公開（公告）號: CN109825470A
• 公開（公告）日: 2019-05-31
• 發明（設計）人: 梁曉燕;方叢
• 申請（專利權）人: 梁曉燕;方叢
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;C12N15/89;C12N5/10
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 顏希文;孫超

本發明公開了骨髓間充質干細胞的線粒體在改善卵母細胞藥物中的應用，屬于生物醫學工程技術領域，母體自身的骨髓間充質干細胞的線粒體的功能良好，注射到卵母細胞后可以改善卵母細胞的質量；骨髓間充質干細胞的線粒體是通過以下步驟進行提取：復蘇骨髓間充質干細胞，進行消化處理；消化后，骨髓間充質干細胞收集到容器中；離心棄上清，再向容器中加入PBS緩沖液進行重懸；骨髓間充質干細胞懸浮后，離心棄上清；向容器中加入預冷的Mito?Cyto Buffer進行重懸，重懸后轉移至另一容器中；對骨髓間充質干細胞混合液進行多次抽吸；骨髓間充質干細胞的勻漿物轉移到另一容器中，離心、收集上清液；對上述步驟收集的上清液繼續離心，收集上清液；重復上述步驟。

技術領域

本發明屬于生物醫學工程技術領域，尤其涉及骨髓間充質干細胞的線粒體在改善卵母細胞藥物中的應用。

背景技術

卵子質量差是導致輔助生殖反復失敗的重要原因。線粒體數目的減少與卵母細胞衰老有關，功能障礙的線粒體會影響卵母細胞成熟的晚期階段和早期胚胎形成。因此，關于改善卵子質量的研究主要集中在改善線粒體的功能上。

研究或臨床應用階段用于改善卵子質量的方法有：1)線粒體活化劑：生長激素、輔酶Q10、白藜蘆醇、左旋肉堿、α-硫辛酸，其中，臨床常用生長激素、輔酶Q10改用于善卵子質量，其余活化劑應用較少；2)線粒體替代治療：細胞漿移植、核移植、紡錘體移植和極體移植；線粒體替代治療還處于實驗研究階段，未進入臨床應用中。

目前，暫無有效改善卵子質量的藥物或方法；原因在于上述兩種方法均存在許多不足：1)線粒體活化劑療效不確切、不顯著，效果有限；2)在線粒體替代治療中，異體細胞移植因會形成三親胚胎的倫理問題；3)在線粒體替代治療中，不同個體來源的線粒體DNA與核基因組合后，暫無系統評估后代的健康風險，不可預測；4)線粒體替代治療的效果不穩定。

因此，有必要研發一種用于改善卵母細胞質量的藥物。

發明內容

本發明目的在于克服現有技術存在的不足，而提供骨髓間充質干細胞的線粒體在改善卵母細胞藥物中的應用，母體自身的骨髓間充質干細胞的線粒體的功能良好，注射到卵母細胞后可以改善卵母細胞的質量：用于體外受精、育兒。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案為：骨髓間充質干細胞的線粒體在制備用于改善卵母細胞質量藥物中的應用。

作為上述技術方案的改進，所述骨髓間充質干細胞的線粒體是通過以下步驟進行提取：

S1)復蘇骨髓間充質干細胞，進行消化處理；消化后，骨髓間充質干細胞收集到容器中；

S2)離心棄上清，再向容器中加入PBS緩沖液進行重懸；骨髓間充質干細胞懸浮后，離心棄上清；

S3)向容器中加入預冷的Mito-Cyto Buffer進行重懸，重懸后轉移至另一容器中，并放入冰塊；對骨髓間充質干細胞混合液進行多次抽吸；

S4)將骨髓間充質干細胞的勻漿物轉移到另一容器中，離心、收集上清液；

S5)對步驟S4收集的上清液繼續離心，收集上清液；

S6)重復步驟S5。

另外，本發明還提供一種用于改善卵母細胞質量的藥物，其包含骨髓間充質干細胞的線粒體。

作為上述技術方案的改進，所述骨髓間充質干細胞的線粒體是通過以下步驟進行提取：

S1)復蘇骨髓間充質干細胞，進行消化處理；消化后，骨髓間充質干細胞收集到容器中；

S2)離心棄上清，再向容器中加入PBS緩沖液進行重懸；骨髓間充質干細胞懸浮后，離心棄上清；