[發明專利]一種用于檢測血流感染致病菌的樣本處理方法在審
| 申請號： | 201910132693.2 | 申請日： | 2019-02-22 |
| 公開（公告）號： | CN110195096A | 公開（公告）日： | 2019-09-03 |
| 發明（設計）人： | 朱留偉;夏江;董德坤 | 申請（專利權）人： | 領航基因科技（杭州）有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6806 | 分類號： | C12Q1/6806;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 北京集佳知識產權代理有限公司 11227 | 代理人： | 劉猛;趙青朵 |
| 地址： | 310000 浙江省杭州市江*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 致病菌 裂解 紅細胞 基因組DNA 分離樣本 血流感染 樣本處理 裂解液 溶劑 沉淀 臨床檢測技術 樣本預處理 致病菌檢測 血細胞 待測樣本 核酸溶液 血液樣本 用血細胞 常規的 活菌體 檢出率 拷貝數 保證 檢測 孵育 混勻 下層 蛋白 | ||
1.一種用于檢測血流感染致病菌的樣本處理方法，其特征在于，包括：
步驟1、待測血液樣本加入紅細胞裂解液進行裂解，將紅細胞裂解后的樣本通過離心獲得包含菌體及白細胞的沉淀，往所述沉淀中加入血細胞裂解液以及與血液不互溶且密度大于全血密度的介質混勻，蛋白裂解并孵育，離心后獲取所述介質及其下層的沉淀，獲得分離樣本；
步驟2、將所述分離樣本同時進行RNA和DNA的提取，獲得混合核酸溶液；
其中，所述血細胞裂解液為鹽酸胍或山梨醇的RNase-free水溶液。
2.根據權利要求1所述樣本處理方法，其特征在于，所述血細胞裂解液為濃度為4-7M的鹽酸胍的RNase-free水溶液或質量百分比濃度為1-5％的山梨醇的RNase-free水溶液。
3.根據權利要去1所述樣本處理方法，其特征在于，所述紅細胞裂解液組成為NH4CL8.29g/L，KHCO3 1.00g/L，Na2EDTA 37.2mg/L，pH 7.2-7.4。
4.根據權利要求1所述樣本處理方法，其特征在于，所述血液樣本和紅細胞裂解液的體積比為1：(1-4)。
5.根據權利要求1所述樣本處理方法，其特征在于，所述包含菌體及白細胞的沉淀與血細胞裂解液的體積比為(1-2)：(1-2)。
6.根據權利要求2所述樣本處理方法，其特征在于，所述步驟具體如下：
步驟2.1、向所述分離樣本中按1:1的比例加入裂解液，加8ul蛋白酶K(25mg/ul)，56℃水浴10-30min左右，孵育期間晃動混勻2次；
步驟2.2、在裂解液孵育后的分離樣本中加入0.2-1微克的carrier RNA并晃動混勻，將上清液加入吸附柱CB3中，離心30s，棄廢液；
步驟2.3、加500ul緩沖液GD，12000rpm離心1分鐘，棄廢液；
步驟2.4、加600ul緩沖液PW，12000rpm離心1分鐘，棄廢液；
步驟2.5、再次離心2min，把吸附柱轉移至干凈的離心管中，室溫放置2min，使乙醇揮發；
步驟2.6、往吸附柱中懸空加入30ul事先預熱的DDW；室溫放置5min，12000rpm離心2min；棄吸附柱，剩下的為混合核酸溶液。
7.根據權利要求1所述樣本處理方法，其特征在于，在將所述分離樣本同時進行RNA和DNA的提取后，還包括將所述RNA逆轉錄為cDNA。
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