[發明專利]檢測阿留申病毒的CPA引物組、試劑、試劑盒及檢測方法和應用

在審

• 申請號: 201910130378.6
• 申請日: 2019-02-21
• 公開（公告）號: CN109609701A
• 公開（公告）日: 2019-04-12
• 發明（設計）人: 邵西群;韋韜;章秀婷
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院特產研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 侯瀟瀟

本發明公開了一種檢測阿留申病毒的CPA引物組、試劑、試劑盒及檢測方法和應用，涉及病毒分子生物學技術領域。該CPA引物組包括剝離引物對和單交叉引物對，剝離引物對的核苷酸序列為SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2，單交叉引物對的核苷酸序列為SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4。該CPA引物組的特異性好，靈敏度高，能有效檢測阿留申病毒。本發明還公開了檢測阿留申病毒的CPA試劑、CPA試劑盒和檢測方法，CPA試劑盒可以快速、靈敏的檢測阿留申病毒，檢測下限低至1.82×10²copies/μL，可實現快速可視化定性檢測，該檢測方法簡便、快速、高效，不需要復雜設備，適合現場快速檢測。

技術領域

本發明涉及病毒分子生物學技術領域，具體而言，涉及一種檢測阿留申病毒的CPA引物組、試劑、試劑盒及檢測方法和應用。

背景技術

阿留申病毒(Amdoparvovirus)歸屬細小病毒科(Parvoviridae)、細小病毒亞科(Parvovirinae)、阿留申病毒屬。阿留申病毒主要感染鼬科動物、臭鼬科和小熊貓科等廣泛的宿主，阿留申病毒是水貂、雪貂、水獺和臭鼬和小熊貓等的阿留申病的病原，也是犬科動物狐屬和貉等的潛在病原。阿留申病毒屬可能存在新病毒種類，感染更廣泛的宿主。其中阿留申水貂病病毒(Aleutian mink disease virus，AMDV)會導致水貂阿留申病，對水貂養殖業危害嚴重。

目前常用的檢測阿留申病毒的方法主要有常規的PCR檢測、CIEP檢測和ELISA檢測。常規的病毒PCR檢測，需要提取核酸，提供精確反應條件，電泳檢測核酸擴增特異條帶，主要在專門的實驗室完成，耗時、實驗條件要求高，在現場應用受限。CIEP通過檢測抗體間接確定病毒感染，不能直接檢測病毒。ELISA檢測定量病毒的抗體需要專業精密儀器，試劑成本較高，在現場應用上有很大限制。

有鑒于此，特提出本發明以解決上述技術問題中的至少一個。

發明內容

本發明的目的在于提供用于檢測阿留申病毒的CPA引物組、試劑、試劑盒及檢測方法，以解決現有技術中缺少一種快速簡便、結果準確、成本低和適合現場檢測阿留申病毒的檢測方法。

為了實現本發明的上述目的，特采用以下技術方案：

第一方面，本發明提供了一種檢測阿留申病毒的CPA引物組，包括剝離引物對和單交叉引物對；

所述剝離引物對的核苷酸序列包括：

BL-F：5’-ctgtMacagaaaccaaccaaggta-3’(SEQ ID NO.1)；

BL-R：5’-ttgaatgttaggRtatctgttgta-3’(SEQ ID NO.2)；

所述單交叉引物對的核苷酸序列包括：

JC-F：5’-gttggtttggttgctctccaaggactccagctgcgccgttgg-3’(SEQ ID NO.3)；

JC-R：5’-actccagctgcgccgttggttggtttggttgctctccaagga-3’(SEQ ID NO.4)。

第二方面，本發明提供了一種檢測阿留申病毒的試劑，包括所述的檢測阿留申病毒的CPA引物組。

第三方面，本發明提供了檢測阿留申病毒的CPA試劑盒，包括所述的檢測阿留申病毒的CPA引物組或所述的檢測阿留申病毒的試劑。

進一步，在本發明提供的技術方案的基礎上，所述CPA試劑盒還包括釋放劑、DNA聚合酶、緩沖液、dNTPs和顯色劑；

優選地，所述CPA試劑盒還包括陽性對照模板；

優選地，所述陽性對照模板為包含所述剝離引物擴增區段的質粒。