[發明專利]兩種基于抗蔓枯病連鎖基因開發的用于甜瓜蔓枯病抗性鑒定的分子標記及其用途

有效

• 申請號: 201910109807.1
• 申請日: 2019-02-11
• 公開（公告）號: CN109797238B
• 公開（公告）日: 2021-06-01
• 發明（設計）人: 楊景華;張明方;胡仲遠
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 金祺

本發明屬于蔬菜抗病分子標記開發和分子標記輔助育種技術領域，具體涉及一種甜瓜抗蔓枯病分子標記開發及其應用，為甜瓜抗蔓枯病的高通量篩選鑒定和回交育種提供一種新型分子標記及輔助選擇方法。本發明公開了兩種基于抗蔓枯病連鎖的單核苷酸多態性開發的用于甜瓜蔓枯病抗性鑒定的分子標記，以甜瓜為物種，為分子標記CmGsbRS5、CmGsbRS6中的任意一個。本發明還同時公開了上述分子標記的用途：用于鑒定甜瓜抗蔓枯病種質或其后代的輔助選擇育種。

技術領域

本發明屬于蔬菜抗病分子標記開發和分子標記輔助育種技術領域，具體涉及一種甜瓜抗蔓枯病分子標記開發及其應用，為甜瓜抗蔓枯病的高通量篩選鑒定和回交育種提供一種新型分子標記及輔助選擇方法。

背景技術

蔓枯病(Gummy stem blight，Gsb)是一種真菌性土傳病害，由瓜類黑腐小球殼菌(Dudymella bryoniae)侵染引起，屬于常壞死營養型真菌，是危害甜瓜的主要病害之一，尤其是在浙江省及東南沿海地區設施栽培高溫高濕條件發生嚴重，大田的發病率可達20％-30％，連作地及溫室高達80％，病害嚴重的年份常造成毀滅性減產。

國內外對甜瓜抗蔓枯病種質鑒定、抗性遺傳規律、抗性基因連鎖分子標記等方面的研究取得了系列進展。通過蔓枯病病原菌接種鑒定，主要從甜瓜野生材料中鑒定到系列抗蔓枯病甜瓜種質，主要包括PI140471、PI157082、PI511890、PI482398、PI482399和PI420145。遺傳分析表明，除PI482399表現為隱性抗性外，其余PI種質均表現為顯性抗性，分別這些抗性基因定名為Gsb-1、Gsb-2、Gsb-3、Gsb-4、Gsb-5和Gsb-6(Frantz et al.,2004；McGrath et al.,1993；Wolukau et al.,2007,2009；Zuniga et al.,1999)。這些優異種質資源為甜瓜抗蔓枯病育種提供重要的基因資源。

早期研究采用傳統分子標記方法，找到了一些與甜瓜抗蔓枯病相關的分子標記，如與抗蔓枯病基因Gsb-1連鎖離為5.2cM的SSR標記CMCT505(劉文睿等，2009)，與抗蔓枯病基因Gsb-2連鎖距離為11.3cM的ISSR標記，定名為ISSR-5760(張永兵等，2011)，與抗蔓枯病基因Gsb-3連鎖距離為8.3cM的ISSR標記，定名為ISSR-100(張學軍等，2013)，與抗蔓枯病基因Gsb-4的遺傳連鎖距離為5.14cM的SSR標記(王紅英等，2012)。與抗蔓枯病基因Gsb-6的遺傳連鎖距離為2cM的AFLP標記，并命名為E-TG/M-CTC200(Wolukau et al.,2009)。但由于分子標記與抗病基因之間遺傳距離較遠，并且為傳統的隨機DNA分子標記，影響甜瓜抗蔓枯病高通量篩選鑒定。

上文中涉及的參考文獻如下：

1.劉文睿,張永兵,周曉慧,陳勁楓.甜瓜抗蔓枯病基因Gsb-1的分子標記及其與抗源PI420145中抗病基因的關系.中國瓜菜,2009,22(5):1-4。

2.王紅英,錢春桃,婁麗娜,婁群峰,張永兵,伊鴻平,吳明珠,陳勁楓.甜瓜抗蔓枯病Gsb-4的分子標記.園藝學報,2012,39(3):574-580。

3.張永兵,陳勁楓,伊鴻平,錢春桃,吳明珠.甜瓜抗蔓枯病基因Gsb-2的ISSR分子標記.果樹學報,2011,28(2):296-300。

4.張學軍,張永兵,張龑,王登明,伊鴻平.甜瓜抗蔓枯病基因Gsb-3的ISSR分子標記.西北植物學報,2013,33(2):261-265。