[發明專利]一種A型口蹄疫病毒的可視化快速檢測試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 201910096812.3
• 申請日: 2019-01-31
• 公開（公告）號: CN109765367A
• 公開（公告）日: 2019-05-17
• 發明（設計）人: 陳豪泰;張永光;孫躍峰;祁林林;張杰;潘麗
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/535;G01N33/58;G01N33/68;G01N21/78
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

本發明提供了一種A型口蹄疫病毒的可視化快速檢測試劑盒及其制備方法，屬于病毒檢測技術領域。A型口蹄疫病毒的可視化快速檢測試劑盒，包括包被酶標板、洗滌液、血清稀釋液、底物顯色液、酶標二抗、終止液、陽性標準品和陰性標準品，所述包被酶標板中包被有A型口蹄疫病毒抗體；所述A型口蹄疫病毒抗體的稀釋倍數為1:1000～2000。所述試劑盒能實現在室溫下可視化檢測，具有操作簡便、快速的特點，適合于在實驗外環境中檢測，為A型口蹄疫病毒的快速檢測提供可靠的技術手段。所述可視化快速檢測試劑盒在A型口蹄疫診斷中的應用。

技術領域

本發明屬于病毒檢測技術領域，具體涉及一種A型口蹄疫病毒的可視化快速檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術

口蹄疫是一種由口蹄疫病毒(FMDV)所致的急性的、熱性的、高度接觸性傳染病，主要侵害偶蹄獸，經常在羊、牛、豬等動物中傳播。發病時易感動物的唇和蹄部出現水皰，同時伴有發燒、食欲不振等癥狀，患病動物體重和產奶量大幅下降。口蹄疫病毒易通過空氣傳播，傳染性強，流行快速，易感動物在抵抗力較弱的情況下也會導致死亡，給養殖戶造成巨大的經濟損失，嚴重阻礙了養殖業的發展。

目前對于A型口蹄疫病毒的診斷只能在實驗室內完成，因為檢測過程需依賴大型檢測儀器得到檢測結果，同時檢測方法繁瑣，對操作人員要求較高，不能滿足基層對A型口蹄疫病毒的快速、簡便的要求。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種A型口蹄疫病毒的可視化快速檢測試劑盒及其制備方法，所述檢測試劑盒能夠通過肉眼觀察得到A型口蹄疫病毒是否存在的檢測結果，實現快速簡便的要求。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種A型口蹄疫病毒的可視化快速檢測試劑盒，包括包被酶標板、洗滌液、血清稀釋液、底物顯色液、酶標二抗、終止液、陽性標準品和陰性標準品，所述包被酶標板中包被有A型口蹄疫病毒抗體；所述A型口蹄疫病毒抗體的稀釋倍數為1:1000～2000。

優選的，所述洗滌液為含體積濃度0.01％～0.05％吐溫-20的1mol/L的磷酸鹽緩沖液；所述洗滌液的pH值為7.2。

優選的，所述血清稀釋液含質量濃度為40～50g/L脫脂奶粉的1mol/L磷酸鹽緩沖液。

優選的，所述底物顯色液為含有體積濃度1％～2％過氧化氫的1mol/L四甲基聯苯胺溶液。

優選的，所述終止液為質量濃度1％的十二烷基硫酸鈉(SDS)水溶液。

優選的，所述酶標二抗的稀釋倍數為1：20000～30000。

本發明提供了所述可視化快速檢測試劑盒的制備方法，包括包被酶標板的制備方法；

所述包被酶標板的制備方法，包括以下步驟：

1)將A型口蹄疫病毒抗體稀釋后得到抗體稀釋液；

2)將抗體稀釋液加入酶標板中的每個孔中，在20～25℃條件下進行一次孵育1～2h；

3)將一次孵育后的酶標板洗滌3～4次，加入封閉液封閉，在20～25℃條件進行二次孵育20min；

4)將二次孵育的酶標板洗滌3～4次，晾干，得到包被酶標板。

優選的，所述抗體稀釋液加入酶標板中的每個孔中的體積為100μl。

優選的，所述封閉液為質量濃度1～2％的小牛血清蛋白水溶液；所述封閉液的添加體積為100μl/孔。