[發明專利]一種培養擴增人肝祖細胞的培養基及其應用

有效

• 申請號: 201910073515.7
• 申請日: 2019-01-25
• 公開（公告）號: CN111607556B
• 公開（公告）日: 2022-06-07
• 發明（設計）人: 李尹雄;潘廷才;陳彥;莊苑琦;楊帆
• 申請（專利權）人: 中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12Q1/02;A61L27/38
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

1.一種擴增培養人肝祖細胞的培養基，其特征在于，所述培養基包括液體基礎培養基、胰島素-轉鐵蛋白-亞硒酸鈉混合液、細胞因子、糖原合成激酶3β抑制劑、Hedgehog信號通路激活劑、轉化生長因子受體β抑制劑和白蛋白；

所述細胞因子包括骨形態發生生長因子、肝細胞生長因子和表皮生長因子；

所述骨形態發生生長因子包括BMP2和/或BMP4；

所述糖原合成激酶3β抑制劑包括CHIR99021和/或CHIR98014；

所述Hedgehog信號通路激活劑包括SAG和/或Purmorphaminede；

所述轉化生長因子受體β抑制劑包括A8301、SB431542或E-616452中的任意一種或至少兩種的組合。

2.根據權利要求1所述的培養基，其特征在于，所述液體基礎培養基包括RMPI1640細胞培養基、DMEM/F12細胞培養基、MEM細胞培養基、DMEM細胞培養基、IMDM細胞培養基、199細胞培養基或F10細胞培養基中的任意一種或至少兩種的組合。

3.根據權利要求1所述的培養基，其特征在于，所述白蛋白包括人重組白蛋白和/或牛血清白蛋白。

4.根據權利要求1所述的培養基，其特征在于，所述白蛋白的質量濃度為5-500μg/mL。

5.根據權利要求1所述的培養基，其特征在于，所述骨形態發生生長因子的質量濃度為1-50ng/mL。

6.根據權利要求1所述的培養基，其特征在于，所述肝細胞生長因子的質量濃度為1-100ng/mL。

7.根據權利要求1所述的培養基，其特征在于，所述表皮生長因子的質量濃度為1-200ng/mL。

8.根據權利要求1所述的培養基，其特征在于，所述糖原合成激酶3β抑制劑的濃度為10nM-100μM。

9.根據權利要求1所述的培養基，其特征在于，所述胰島素-轉鐵蛋白-亞硒酸鈉混合液的體積百分含量為0.1-10%。

10.根據權利要求1所述的培養基，其特征在于，所述轉化生長因子受體β抑制劑的摩爾濃度為50nM-50μM。

11.根據權利要求1所述的培養基，其特征在于，所述Hedgehog信號通路激活劑的摩爾濃度為10nM-50μM。

12.一種長期體外擴增培養人肝祖細胞的方法，其特征在于，采用權利要求1-11中任一項所述的培養基培養人肝祖細胞。

13.根據權利要求12所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

（1）獲取Ep-CAM⁺/C-kit^-的肝祖細胞；

（2）采用權利要求1-11中任一項所述培養基對步驟（1）獲取的細胞進行體外培養傳代。

14.根據權利要求13所述的方法，其特征在于，步驟（1）所述肝祖細胞的來源包括人多能干細胞。

15.根據權利要求13所述的方法，其特征在于，步驟（1）所述獲取的方法包括流式細胞術分選。

16.根據權利要求13所述的方法，其特征在于，具體包括如下步驟：

（1）流式細胞術分選獲取Ep-CAM⁺/C-kit^-的肝祖細胞，所述肝祖細胞的來源包括人多能干細胞；

（2）采用權利要求1-11中任一項所述培養基對步驟（1）獲取的細胞進行體外培養傳代。