[發(fā)明專利]一種含葡萄糖氧化酶和釀酒酵母的霉菌毒素生物降解劑及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910053293.2
• 申請日: 2019-01-21
• 公開（公告）號: CN109554356B
• 公開（公告）日: 2022-11-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張秀江;胡虹;王秋菊;谷立峰;卓輝
• 申請（專利權(quán)）人: 河南省科學院生物研究所有限責任公司
• 主分類號: C12N9/04
• 分類號: C12N9/04;C12N1/18;A23L5/20;C12R1/865
• 代理公司: 鄭州天陽專利事務(wù)所(普通合伙) 41113
• 代理人: 聶孟民

1.一種含葡萄糖氧化酶和釀酒酵母的霉菌毒素生物降解劑，其特征在于，是由質(zhì)量比：葡萄糖氧化酶和釀酒酵母yk18發(fā)酵培養(yǎng)物1︰1～9混合均勻制成，霉菌毒素生物降解劑中葡萄糖氧化酶活力≥1000 u/g，釀酒酵母活菌數(shù)≥1.0×10⁸個/g；

所述的葡萄糖氧化酶為粉末狀飼料添加劑葡萄糖氧化酶，酶活力≥5000 u/g，或液體飼料添加劑葡萄糖氧化酶，酶活力≥10000 u/mL；葡萄糖氧化酶的酶活力定義為在pH為6.0，溫度為30℃的有氧條件下，每分鐘催化1μmol的β-D-葡萄糖轉(zhuǎn)化為D-葡萄糖酸和過氧化氫所需的酶量即為一個葡萄糖氧化酶酶活性單位（U）；

所述的釀酒酵母yk18為2018年10月18日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號CGMCC No：16598的釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae），地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號；

所述的釀酒酵母yk18發(fā)酵培養(yǎng)物的制備方法是：

a、生產(chǎn)菌種的制備：將低溫保存的釀酒酵母yk18在平板種子培養(yǎng)基上活化，挑取單菌接種于含液體發(fā)酵培養(yǎng)基的試管中，32℃，200r/min搖床培養(yǎng)24小時后，以v/v計的2%轉(zhuǎn)接于含液體發(fā)酵培養(yǎng)基的500ml的三角瓶中，32℃，200r/min搖床培養(yǎng)24h，得到釀酒酵母yk18發(fā)酵培養(yǎng)種子液；

b、液體深層有氧發(fā)酵：在1000ml的三角瓶加入液體發(fā)酵培養(yǎng)基300ml，按v/v計的5%添加量加入液體發(fā)酵種子液15mL，32℃，200r/min搖床培養(yǎng)24h，得到釀酒酵母yk18液體發(fā)酵培養(yǎng)液；

c、固體無氧發(fā)酵：在1000ml的三角瓶中加入固體發(fā)酵培養(yǎng)基200g，按質(zhì)量比3％的添加量將釀酒酵母yk18液體發(fā)酵培養(yǎng)液6g加到含固體培養(yǎng)基的三角瓶中，用無菌玻璃棒攪拌均勻，密封瓶口，放于32℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h，均勻散于瓷盤中，室溫風干，粉碎過60-80目篩，經(jīng)檢測含釀酒酵母活菌≥2.5×10⁸個/g，即為釀酒酵母yk18發(fā)酵培養(yǎng)物；

所述的種子平板培養(yǎng)基是：將10g酵母膏和20g蛋白胨于900ml溶解于水中，加入20g瓊脂粉，121℃滅菌20min，加入100ml 含20g葡萄糖滅菌溶液，調(diào)pH值6.5，制成斜面或平板培養(yǎng)基；

所述的種子液體培養(yǎng)基是： 將酵母膏10g和蛋白胨20g溶解在900ml水中，121℃滅菌20min，加入100ml 含20g葡萄糖滅菌溶液，調(diào)pH值6.5；

所述的液體發(fā)酵培養(yǎng)基是：稱取麥芽汁培養(yǎng)基130.1g，加入蒸餾水或去離子水1000ml，攪拌加熱煮沸至完全溶解，121℃滅菌20min；

所述的固體發(fā)酵培養(yǎng)基是：按質(zhì)量配比麩皮∶玉米芯粉∶玉米粉∶豆粕粉＝4﹕2﹕2﹕2,按培養(yǎng)基干物質(zhì)的總質(zhì)量添加3%硫酸銨，加水使培養(yǎng)基含水量達到68%，pH值6.5，121℃滅菌60mi；所述的麩皮、玉米芯粉、玉米粉、豆粕粉均過80目篩，含水量﹤10.0%，其中麩皮：粗蛋白≥15.0%，粗纖維﹤9.0%，粗灰分﹤6.0%；玉米芯粉：粗蛋白≥2.2%，粗纖維﹤29.7%，粗灰分﹤6.0%；玉米粉：粗蛋白≥10.0%，粗纖維﹤9.0%，粗灰分﹤6.0%；豆粕粉：粗蛋白≥44.0%，粗纖維﹤5.0%，粗灰分﹤6.0%。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含葡萄糖氧化酶和釀酒酵母的霉菌毒素生物降解劑，其特征在于，由質(zhì)量比的葡萄糖氧化酶和釀酒酵母yk18發(fā)酵培養(yǎng)物1∶1混合均勻，經(jīng)檢測，葡萄糖氧化酶活力≥1000 u/g，釀酒酵母活菌數(shù)≥1.0×10⁸個/g，即成霉菌毒素生物降解劑。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含葡萄糖氧化酶和釀酒酵母的霉菌毒素生物降解劑，其特征在于，由質(zhì)量比的葡萄糖氧化酶和釀酒酵母yk18發(fā)酵培養(yǎng)物1∶4混合均勻，經(jīng)檢測，葡萄糖氧化酶活力≥1000 u/g，釀酒酵母活菌數(shù)≥1.0×10⁸個/g，即成霉菌毒素生物降解劑。